局部封閉涂皮試驗（Buehler test，BT）和豚鼠最大值試驗（uinea pig maximisation test，GPMT）是實驗動物通過多次皮膚涂抹（誘導接觸）或皮內(nèi)注射受試物10d~14d（誘導階段）后，給予激發(fā)劑量的受試物，觀察實驗動物，并與對照動物比較對激發(fā)接觸受試物的皮膚反應強度。

小鼠局部淋巴結(jié)分析試驗（locallymph node assay，LLNA）是通過耳部給予實驗動物受試物，引起淋巴結(jié)的淋巴細胞增生，淋巴細胞增生與受試物劑量（過敏程度）成比例。利用放射性標記方法，測定試驗組與對照組淋巴細胞的標記率，并進行對比，獲得刺激指數(shù)，評價致敏強度。

應用范圍

應用于科研、農(nóng)業(yè)、衛(wèi)生、教育、霧霾狀態(tài)可吸入顆粒染毒效果研究等各個領(lǐng)域

符合標準：

GB/T 15670.9-2017《農(nóng)藥登記毒理學試驗方法第9部分皮膚bian態(tài)反應（致敏）試驗》

試驗步驟：

1. Buehler Test（BT）

動物模型：豚鼠

操作步驟：

誘導階段：通過封閉式皮膚涂抹受試物，持續(xù)10-14天。

激發(fā)階段：間隔后再次涂抹受試物，觀察皮膚反應。

觀察指標：紅斑、水腫等皮膚炎癥反應的強度（主觀評分）

優(yōu)點:

模擬人類皮膚接觸途徑，適用于局部制劑（如化妝品、外用藥物）無需注射，操作相對溫和。

缺點：

敏感性較低，可能漏檢弱致敏物，依賴主觀評分，存在實驗者偏差。

應用場景：傳統(tǒng)化妝品、外用藥品的安全性評估。

2.豚鼠最大值試驗（GPMT）

動物模型：豚鼠

操作步驟：

誘導階段：皮內(nèi)注射受試物（常聯(lián)合弗氏佐劑）結(jié)合皮膚涂抹，持續(xù)10-14天。

激發(fā)階段：再次涂抹受試物，評估皮膚反應。

觀察指標：與BT類似，但反應更強烈（紅斑、水腫、硬結(jié)）

優(yōu)點：

敏感性高，可檢測強致敏物和弱致敏物；尤其適用于化學品和工業(yè)原料。

缺點：

使用佐劑可能引發(fā)過度免疫反應，導致假陽性；動物痛苦程度較高，倫理爭議較大。

應用場景：

工業(yè)化學品、強致敏性物質(zhì)（如染發(fā)劑、橡膠添加劑）的嚴格檢測。

3.小鼠局部淋巴結(jié)試驗（LLNA）

動物模型：小鼠

操作步驟：

誘導階段：連續(xù)3天耳部涂抹受試物。

檢測指標：通過3H-胸苷或BrdU標記增殖的淋巴細胞，計算刺激指數(shù)（SI）

觀察指標：淋巴結(jié)淋巴細胞增殖程度（SI>3判為陽性）

優(yōu)點:

客觀定量：減少主觀評分誤差；

符合3R原則：動物用量少，無需激發(fā)階段，痛苦小；

高效快速：試驗周期短（約1周）。

缺點：

對某些物質(zhì)（如金屬鹽）敏感性不足，需使用放射性物質(zhì)或特殊設(shè)備，成本較高。

應用場景：歐盟等法規(guī)優(yōu)先推薦的替代方法，廣泛用于藥品、化妝品及化工產(chǎn)品的初篩。

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皮膚bian態(tài)反應（致敏）試驗儀

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