北京協(xié)和醫(yī)院發(fā)布了病毒核酸檢測標(biāo)準(zhǔn)操作流程（文末有協(xié)和醫(yī)院發(fā)布詳細(xì)文章及視頻連接）
樣本的核酸提取
A、手工核酸提取操作流程（以凱杰的52906柱提法盒為例）
（1）裂解液配制：在基因擴(kuò)增實驗室的試劑配制區(qū)或單獨的普通試劑配制實驗室中，準(zhǔn)備核酸提取所需的洗液1（AW1）、洗液2（AW2）和carrier RNA。按照要求，分別向洗液1和洗液2中加入分子生物學(xué)級別的130ml和160ml的無水乙醇并及時做好標(biāo)記；取310μl洗脫液（AVE）溶解310μg/支的Carrier RNA。配置好后，通過傳遞窗進(jìn)入核酸提取區(qū)或由工作人員送入核酸提取專用實驗室。
（2）樣本裂解：取560μl AVL裂解液到1.5ml無菌EP管中，加入5.6μl配制好的Carrier RNA，再加入已經(jīng)滅活的140μl樣本（例如、血漿等），混勻振蕩15秒，室溫靜置10分鐘，充分裂解樣本中的核酸。將EP管瞬時離心后加入560μl無水乙醇，充分混勻15秒，再次瞬時離心后備用。吸取630μl裂解產(chǎn)物，小心加入至離心柱中，8000rpm（或6000g）離心1分鐘，轉(zhuǎn)移離心柱至新收集管，將剩余630μl裂解產(chǎn)物加到離心柱中，重復(fù)上一離心操作（若樣本體積大于140μl，則在此步驟重復(fù)將630μl裂解產(chǎn)物過濾收集在一個離心柱上）。
（3）核酸的洗滌：取500μl洗液1（AW1）至離心柱中，8000rpm（或6000g）離心1分鐘；換新收集管后，取500μl洗液2（AW2）至離心柱中，8000rpm（或6000g）離心1分鐘；換新收集管后，用14000rpm（或20000g）離心3分鐘，去除洗液2（AW2）；換新收集管后，繼續(xù)用離心機(jī)轉(zhuǎn)速（20000g）離心1分鐘，充分甩離殘留的洗液2（AW2）。
（4）核酸的洗脫和回收：取一1.5ml無菌EP管，將離心柱放入其中，加入洗脫液（AVE）40~60μl，室溫靜置1分鐘后，用8000rpm離心1分鐘回收核酸，以備PCR檢測使用。
2.要點提示：
●新鮮裂解液的配制應(yīng)盡可能在專門的潔凈區(qū)域或單獨的實驗室進(jìn)行。
●要用分子生物學(xué)級別的無水乙醇試劑進(jìn)行配制。
●向離心柱中加入裂解產(chǎn)物、洗液時操作要非常小心，盡量將洗頭下探到離心柱內(nèi)部后靠管壁加樣，切忌出現(xiàn)溢灑后污染到離心柱的密封圈，這可能會導(dǎo)致乙醇?xì)埩簦种坪罄m(xù)PCR反應(yīng)。離心操作時盡量選擇支持生物安全的離心機(jī)（例如廣州吉迪儀器有限公司生產(chǎn)JIDI-18H或JIDI-18RH）
●從離心機(jī)中取出離心柱時應(yīng)小心操作，避免離心柱下緣被收集管中的濾過殘液污染。
●加入洗液2（AW2）后的第二次空管全速離心非常關(guān)鍵，能幫助充分甩離離心柱濾膜中殘留的洗液2殘液，確保洗脫核酸的純度。
●洗脫液加樣時需小心操作，確保洗脫液盡可能覆蓋全部離心柱濾膜，充分洗脫核酸，提高核酸提取的產(chǎn)量。
●手工核酸提取可優(yōu)選使用檢測試劑盒說明書推薦的配套手工提取試劑，也可選用通用手工提取試劑。
●樣本處理過程中，工作人員覺得有必要時，應(yīng)隨時更換新的外層乳膠手套。
B、采用核酸提取儀提取核酸的操作流程
根據(jù)核酸提取儀和試劑的說明書準(zhǔn)備好提取試劑，取200μl樣本上機(jī)提取核酸，并按照要求回收提取好的核酸備用。
2.要點提示：
●不同的提取儀器和試劑的提取效率可能存在差異，請一定嚴(yán)格按照提取試劑盒的說明書進(jìn)行核酸提取操作。
●有條件時可以考慮配備小型化的核酸提取儀在安全柜內(nèi)使用，以進(jìn)一步加強(qiáng)生物安全防護(hù)；若使用在安全柜外的核酸提取儀，則一定要做好生物安全防護(hù)及樣本的防污染保護(hù)。
全面解析 | 北京協(xié)和醫(yī)院2019病毒的核酸檢測流程
