蛋白質(zhì)的內(nèi)源熒光主要來源于芳香族氨基酸如色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸。在水中，色氨酸的最大激發(fā)光波長在270-280nm左右而其發(fā)射光波長峰值接近350nm。蛋白的發(fā)射光譜對溶劑的極性和外界環(huán)境十分敏感。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)變性時，色氨酸殘基會暴露在水中而其發(fā)射波長會變長。這種發(fā)射波長峰值的改變可以用來檢測蛋白質(zhì)的變性。
在這里，我們將展示如何運用SpectraMax®iD3多功能微孔板讀板機檢測內(nèi)源色氨酸熒光。色氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線用來顯示檢測方法的高靈敏性，而色氨酸發(fā)射峰值的偏移則用溶菌酶變性實驗來檢測。溶菌酶包含有兩個色氨酸殘基，因此受到紫外光照射時會發(fā)射熒光。當(dāng)溶菌酶降解時，色氨酸的發(fā)射光峰值會偏移6-10nm。我們可以對降解前后的溶菌酶進行熒光光譜掃描來捕獲和檢測發(fā)生的峰值偏移。
SpectraMax® iD3多功能微孔板讀板機兼具內(nèi)源色氨酸熒光檢測所需的高靈敏度和波長掃描能力。另外，SoftMax® Pro 軟件可以通過Spectral Optimization Wizard自動識別最最佳的激發(fā)和發(fā)射波長，同時自動計算發(fā)射峰值的偏移，并用于后續(xù)分析。
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