活性氧 (Reactive oxygen species，ROS) 是一類由細(xì)胞有氧代謝產(chǎn)生的具有化學(xué)反應(yīng)活性的一類含氧分子，參與細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、免疫防御以及維持體內(nèi)動態(tài)平衡等各項生理活動。然而當(dāng)細(xì)胞處于環(huán)境壓力時，胞內(nèi)的 ROS 含量水平就會急劇上升造成核酸、蛋白和脂類物質(zhì)的氧化損傷，從而引起許多生理、病理變化，諸如男性不育、癌癥的發(fā)生等等。
胞內(nèi) ROS 含量水平通常采用熒光探針，尤其綠色熒光探針來檢測。然而由于綠色熒光檢測和成像易受細(xì)胞自發(fā)熒光的影響，因此遠(yuǎn)/近紅外染料常被用來檢測 ROS 含量從而避免細(xì)胞自發(fā)熒光的干擾。
SpectraMax® iD5 多功能微孔讀板機(jī)采用超冷型 PMT 和“2X2”光柵光路設(shè)計，可有效降低信號背景減少雜散光，為遠(yuǎn)紅外熒光檢測提供更寬的動態(tài)范圍和更高的靈敏度。這里我們展示的是如何利用 SpectraMax iD5多功能微孔讀板機(jī)和 2 個熒光檢測試劑盒來進(jìn)行胞內(nèi) ROS 含量分析的。在 Spectral
Optimization Wizard 幫助下，我們優(yōu)化了遠(yuǎn)紅外分析檢測下激發(fā)光和發(fā)射光的不同波長組合，并最終比較了綠色熒光檢測和遠(yuǎn)紅外熒光檢測結(jié)果的表現(xiàn)。
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