Anti-RYBP抗體，凋亡相關(guān)蛋白1抗體

規(guī)格：100ul，200ul，1mg

宿主：兔，鼠，羊

Ig類型：IgG

克隆類型：單克隆/多克隆

標(biāo)記物：無標(biāo)記物.

需要標(biāo)記抗體，可咨詢客服訂購。相關(guān)標(biāo)記抗體：HRP標(biāo)記抗體,Biotin標(biāo)記抗體,Gold標(biāo)記抗體,RBITC標(biāo)記抗體,AP標(biāo)記抗體,FITC標(biāo)記抗體,Cy3標(biāo)記抗體,Cy5標(biāo)記抗體,Cy5.5標(biāo)記抗體,Cy7標(biāo)記抗體,PE標(biāo)記抗體,PE-Cy3標(biāo)記抗體,PE-Cy5標(biāo)記抗體,PE-Cy5.5標(biāo)記抗體,PE-Cy7標(biāo)記抗體,APC標(biāo)記抗體,Alexa Fluor 350標(biāo)記抗體,Alexa Fluor 488標(biāo)記抗體,Alexa Fluor 555標(biāo)記抗體,Alexa Fluor 647標(biāo)記抗體

濃度 ：1mg/ml

純化方式：抗原特異性親和純化

緩沖液成分：0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol.

應(yīng)用： WB;IHC-P、IHC-F; ICC; IP;IF;ELISA。如果抗體需用于流式細胞術(shù)，請參見流式抗體。具體適用的實驗和針對的物種請來電或99咨詢。公司提供Elisa實驗配對抗體抗原，需要請電詢或99咨詢。

產(chǎn)品稀釋比例：ELISA=1:1000，Western blotting=1:500，IF=1:100-50，IHC-P=1:100-500，IHC-F=1:100-500，Immunohistocry=1:100-500

Optimal working dilutions must be determined by end user.

保質(zhì)期：1年

儲存溫度：-20℃（避免反復(fù)凍融）

Anti-RYBP抗體，凋亡相關(guān)蛋白1抗體

蛋白質(zhì)樣品（抗原）的制備：①  細胞的處理方法：向收集到的細胞中加入RIPA裂解緩沖液（三中蛋白酶抑制在使用前加入，終濃度為2ug/ml）在冰上裂解30—60min，然后再插入冰盒進行超聲，超聲強度以不產(chǎn)生泡沫為準(zhǔn)，超聲每次2-3秒，重復(fù)3-4次，再離心12000rpm3-5min，吸取上清備用。（超聲強度不能過大，防止蛋白碳化）組織的處理方法：按實驗要求將組織從動物體內(nèi)取出（樣品不宜反復(fù)凍融），取少量（1-2g左右）放入玻璃勻槳器中研磨成勻漿，然后轉(zhuǎn)入EP管中進行超聲，超聲強度以不產(chǎn)生泡沫為準(zhǔn)，超聲每次5-7秒，重復(fù)5-6次，再離心12000rpm3-5min，吸取上清備用。②上述兩種方法得來的樣品處理液還要加入1/4體積左右的上樣Buffer，然后放在沸水浴中加熱3-4min使蛋白變性，方可作為樣品點樣。（注意：在加熱組織裂解液時，肝臟和腎臟組織要特別注意其本身濃度，在制作裂解液時就適當(dāng)稀釋，否則加熱后會凝結(jié)成固態(tài)。還有些組織處理后很粘稠，有帶絲狀物，這是未裂解的核酸，可以適當(dāng)離心后再用。）免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產(chǎn)生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性Balb/c小鼠，按照預(yù)先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進入外周免疫器官，刺激相應(yīng)B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。 2、細胞融合 采用眼球摘除放血法處死小鼠，無菌操作取出脾臟，在平皿內(nèi)擠壓研磨，制備脾細胞懸液。 將準(zhǔn)備好的同系骨髓瘤細胞與小鼠脾細胞按一定比例混合，并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各種淋巴細胞可與骨髓瘤細胞發(fā)生融合，形成雜交瘤細胞。 3、選擇性培養(yǎng) 選擇性培養(yǎng)的目的是篩選融合的雜交瘤細胞，一般采用HAT選擇性培養(yǎng)基。在HAT培養(yǎng)基中，未融合的骨髓瘤細胞因缺乏次黃嘌呤-*-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，不能利用補救途徑合成DNA而死亡。 未融合的淋巴細胞雖具有次黃嘌呤-*-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，但其本身不能在體外長期存活也逐漸死亡。 只有融合的雜交瘤細胞由于從脾細胞獲得了次黃嘌呤*磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，并具有骨髓瘤細胞能無限增殖的特性，因此能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖。 4、雜交瘤陽性克隆的篩選與克隆化 在HAT培養(yǎng)基中生長的雜交瘤細胞，只有少數(shù)是分泌預(yù)定特異性單克隆抗體的細胞，因此，必須進行篩選和克隆化。通常采用有限稀釋法進行雜交瘤細胞的克隆化培養(yǎng)。采用靈敏、快速、特異的免疫學(xué)方法，篩選出能產(chǎn)生所需單克隆抗體的陽性雜交瘤細胞，并進行克隆擴增。經(jīng)過全面鑒定其所分泌單克隆抗體的免疫球蛋白類型、亞類、特異性、親和力、識別抗原的表位及其分子量后，及時進行凍存。