百歐博偉生物 固相微萃取技術(shù)經(jīng)過十幾年的發(fā)展，已經(jīng)十分成熟。特別是與GC的聯(lián)用，可以使用商品化的自動(dòng)進(jìn)樣器完成萃取和進(jìn)樣等步驟，但對(duì)于液相色譜，卻一直沒有適用的自動(dòng)進(jìn)樣設(shè)備，只能使用手動(dòng)進(jìn)樣器與HPLC接口完成直接進(jìn)樣。作為一種樣品前處理技術(shù)，如果不能實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化進(jìn)樣，就很難用于常規(guī)分析，因此，Pawliszyn又于1997年提出毛細(xì)管固相微萃取(in-tube SPME)方法，將涂有固定相的GC毛細(xì)管柱用于樣品萃取，并與商品化HPLC自動(dòng)進(jìn)樣器相連，尤需使用特殊的接口進(jìn)行解析，使固相微萃取與液相色譜的聯(lián)用實(shí)現(xiàn)了自動(dòng)化。同時(shí)還克服了纖維SPME的涂層經(jīng)溶劑浸泡洗脫容易造成溶脹脫落的問題。也有人將此技術(shù)稱為涂層毛細(xì)管微萃取(coated capillary microextrac-tion，CCME)。

由于任何GC開管毛細(xì)管柱都可以用于in-tube SPME，也大大拓寬了SPME-HPLC技術(shù)的應(yīng)用范圍。目前可供使用的GC毛細(xì)管柱多種多樣，強(qiáng)極性的固定相種類更遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于商品化的SPME纖維，使之更適合于強(qiáng)極性化合物的測(cè)定。

毛細(xì)管SPME的裝置與操作過程

將一段GC開管毛細(xì)管柱安裝在HPLC自動(dòng)進(jìn)樣針和進(jìn)樣管之間，為避免計(jì)量泵的污染，進(jìn)樣管應(yīng)一直置于流路中。毛細(xì)管的連接使用的是一小段聚醚醚酮(Polyether Ether Ketone，PEEK)材質(zhì)的微管，再用一不銹鋼箍與流路相連。萃取之前，需用流動(dòng)相如甲醇等沖洗毛細(xì)管，并使流動(dòng)相停留在毛細(xì)管中。萃取開始后．將六通閥扳到“Load"位置，進(jìn)樣針在微機(jī)的控制下，反復(fù)將樣品瓶中的樣品吸入、排出毛細(xì)管若十次。當(dāng)樣品被吸入毛細(xì)管時(shí)，分析物就被富集在管壁的固定相中，而當(dāng)樣品被排出毛細(xì)管，回到樣品瓶中時(shí)，流動(dòng)相又再次進(jìn)入毛細(xì)管，固定相卜萃取的分析物就有可能解析下來，因此流動(dòng)相造成的影響需通過優(yōu)化試驗(yàn)加以解決。萃取結(jié)束后，進(jìn)樣針會(huì)從溶劑瓶中吸入流動(dòng)相或其他溶劑洗脫固定相中富集的分析物，帶入后面的進(jìn)樣管(Loop)中，待分析物解吸*之后．將六通閥搬到“Injection"的位置．使流動(dòng)相將進(jìn)樣管中的分析物帶入液相色譜柱分離測(cè)定。整個(gè)裝置和操作過程如圖3-13所示。

應(yīng)用自動(dòng)進(jìn)樣器可以使萃取、解吸和進(jìn)樣過程不問斷進(jìn)行，也提高了分析的準(zhǔn)確度和精密度．多次測(cè)定的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于6％。當(dāng)樣品中含有分配系數(shù)較高的分析物時(shí)。所需的平衡時(shí)間較長(zhǎng)，但樣品被反復(fù)吸入和排出毛細(xì)管，口丁以起到攪動(dòng)樣品的作用，縮短到達(dá)吸附平衡的時(shí)間。由于分析物在每次流動(dòng)相排出毛細(xì)管時(shí)都會(huì)有部分解吸，所以in-tube SPME不能*萃取樣品中的分析物通常萃取的化合物量取決于涂層的極性、樣品被吸入排出毛細(xì)管的次數(shù)和體積，以及樣品的pH值。

毛細(xì)管內(nèi)的涂層選擇與纖維SPME方法相同，也遵循“相似相溶"的原則，針對(duì)極性的化合物，應(yīng)選擇極性的涂層。用于萃取的毛細(xì)管長(zhǎng)度在60～60cm范圍內(nèi)是很好的。毛細(xì)管太短，萃取效率較低，毛細(xì)管太長(zhǎng)，萃取的分析物在解析時(shí)過于分散，就會(huì)出現(xiàn)峰展寬的現(xiàn)象。樣品總的吸排體積可以用進(jìn)樣針和毛細(xì)管的總體積來計(jì)算．增加吸排的次數(shù)和體積也能提高萃取效率，但經(jīng)常使色譜峰展寬。樣品吸排的流速會(huì)同時(shí)影響萃取率和方法的精密度，即較高的吸排速度一方面可以良好地?cái)噭?dòng)樣品，使分析物的質(zhì)量傳遞加快，增加萃取效率；另一方面。又會(huì)使流動(dòng)相中產(chǎn)生氣泡，降低萃取的效率和精密度。因此優(yōu)的吸排流速范圍是50～100uL·min-1。低于此流速范圍，萃取時(shí)問較長(zhǎng)，不利于快速分析的進(jìn)行。

平衡時(shí)間對(duì)in-tube SPME也十分重要。不同于纖維SPME，其萃取時(shí)間的優(yōu)化需要通過萃取量對(duì)吸排樣品的次數(shù)作優(yōu)化曲線來進(jìn)行選擇：而其他的萃取條件如樣品的pH值、鹽度等．調(diào)節(jié)方式則與纖維SPME方法相同。

進(jìn)樣的體積就是*解吸分析物所需的流動(dòng)相體積。Gou等用60cm長(zhǎng)的毛細(xì)管萃取分析物．之后再用不同體積的流動(dòng)相洗脫，根據(jù)得到的色譜峰分析，發(fā)現(xiàn)洗脫曲線并非線性的開始的20uL，流動(dòng)相使62％的分析物解吸，接下來的20uL才又解吸了24％的分析物，若使分析物達(dá)到解吸共需要60uL的流動(dòng)相。

比較in-tube SPME方法與纖維 SPME法，二者各有各的優(yōu)缺點(diǎn)，但大的差別就在于萃取的化合物一個(gè)是富集在纖維的表面，另一個(gè)是富集在毛細(xì)管的內(nèi)壁in-tube SPME使用細(xì)徑毛細(xì)管，為防止柱和流路的堵塞，必須在萃取前去除樣品中的顆粒物，因此in-tube SPME適合潔凈水樣的分析。而纖維SPME不用去除樣品中的顆粒物，因?yàn)榭梢杂庙斂蛰腿∠蓴_?；蛟谥苯虞腿『笥盟疀_洗纖維清除其上的顆粒物，但纖維易于折斷，還會(huì)在進(jìn)樣和攪動(dòng)中遭到破壞。

in-tube SPME和纖維SPME均可與HPLC聯(lián)用，但二者的進(jìn)樣方式也存在差別。纖維SPME中．要將纖維暴露在進(jìn)樣接日中，用流動(dòng)相或其他溶劑沖洗纖維，待分析物完個(gè)解吸后，再進(jìn)入色譜柱分離。由于某些分析物從纖維上洗脫速度較慢，常常造成色譜峰展寬的現(xiàn)象而in-tube SPME中，用流動(dòng)相或其他解吸溶劑通過毛細(xì)管柱，直接解吸并使分析物進(jìn)入分離柱，實(shí)現(xiàn)了解吸、進(jìn)樣的一體化，峰展寬的現(xiàn)象得以緩解。

百歐博偉生物（biobw）是北京的一家專業(yè)于生物技術(shù)的研究與廣泛運(yùn)用及推廣的高科技公司，位于北京企業(yè)林立的豐臺(tái)區(qū)造甲街，生物技術(shù)推廣及運(yùn)用早于2011年開始，成立公司于2013年一月。本公司主要提供色譜耗材、色譜儀器、固相萃取裝置、化學(xué)試劑、樣品瓶、氘燈、標(biāo)準(zhǔn)品、微生物技術(shù)、菌種保藏服務(wù)以及ATCC產(chǎn)品代理等產(chǎn)品及服務(wù)。