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冷凍干燥菌種的轉(zhuǎn)接技術(shù)!
冷凍干燥菌種的轉(zhuǎn)接技術(shù)!
建議用下列方法恢復(fù)培養(yǎng)冷凍干燥保藏的菌種。
一、安瓶管開封
1.用浸過70%酒精的脫脂棉擦凈安瓿管。
2.用火焰將安瓿管頂端加熱。
3.滴無菌水至加熱的安瓿管頂端使玻璃開裂。
4.用挫刀或鑷子敲下已開裂的安瓿管的頂端。
二、菌株恢復(fù)培養(yǎng)
1.用無菌吸管,吸取0.3~0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基,滴人安瓿管內(nèi),輕輕振蕩,使凍于菌體溶解呈懸浮狀。
2.取0.1~0.2ml菌體懸浮液,移植于適宜的瓊脂斜面/平板培養(yǎng)基上,剩余的菌液,注入適宜的液體培養(yǎng)基內(nèi),然后在建議的溫度下培養(yǎng)。
3.若未能活化,或活化后有疑問時(shí),請于收到菌種1個(gè)月內(nèi),通知保藏中心,經(jīng)查證無誤后,即免費(fèi)補(bǔ)寄。
三、注意事項(xiàng)
1.菌種活化前,請將安瓿管保存在6一10的環(huán)境下。
2.厭氧菌的培養(yǎng),如無特別說明,自開封至接種完成,均需以無氧氣體充填,以保持厭氧狀態(tài)。
3.某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后,延遲期較長,需連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長,此時(shí)請將步驟二(2)重復(fù)一次。
四、液氮超低溫保藏程序
1、容器的選擇:使用帶螺旋蓋的2ml塑料安培瓶。
2、檢查安培瓶是否滲漏:用0.05%的亞甲基藍(lán)水溶液在4浸泡30-45分鐘,沖洗干凈,棄去含有藍(lán)色染料的安培瓶,其余的安培瓶備用。
3、打印標(biāo)簽(激光打印)。
4、容器的滅菌:先用蒸餾水漂洗干凈安培瓶,再用蒸餾水在滅菌鍋中121浸泡滅菌15分鐘,干燥并將打印好的標(biāo)簽放入安培瓶中,略擰緊螺旋蓋,再行121滅菌30分鐘。
5、保藏菌菌齡:處于大生長量階段或?qū)?shù)生*后期。
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