進(jìn)行檢測時，先將試件放于瓊脂培養(yǎng)皿上，一片相同規(guī)格的菌片放于試件上面，再蓋上一片厚約10微米的高密度聚乙烯膜，用錐形鋼環(huán)將三層材料(試驗材料在下，菌片居中，高密度聚乙烯膜在上面)卡在一起，將此環(huán)套件置于轉(zhuǎn)盤上的瓊脂培養(yǎng)皿上，試驗指以能在整個培養(yǎng)皿表面上移動的方式作用于材料，使材料受到壓力和摩擦的綜合作用，以此模擬在實際應(yīng)用過程中屏障材料可能發(fā)生的受力情況和濕態(tài)條件下的微生物穿透。菌片上的微生物穿透試驗材料后會遷移到瓊脂培養(yǎng)基表面，通過對瓊脂培養(yǎng)皿的培養(yǎng)和菌落計數(shù)，可對試驗材料的穿透性能進(jìn)行定量評價。

操作步驟：

1、菌片制備

*ATCC29213在*大豆瓊脂上36℃±1℃下培養(yǎng)18-24h，將2-3個菌落接種至3ml*大豆肉湯中，在36℃±1℃下培養(yǎng)18-24h。用蛋白胨水1:10稀釋至濃度為1×104CFU/mL~4×104CFU/mL，對zui終菌懸液進(jìn)行計數(shù)。

打開無菌袋取出仍貼附在智商的聚氨酯膜，將載菌材料片的可浸濕聚氨酯膜面朝上放在潔凈度盤子上，為了便于操作，用雙面膠帶將載菌材料片的四角固定于盤子上。用培養(yǎng)皿蓋作為模板在載菌膜上化出一個相應(yīng)的區(qū)域，在該區(qū)域涂布1.0ml*懸浮液，然后將菌片至于56℃干燥大約30min，在干燥期間采用消毒的玻璃涂布器在載菌膜上繼續(xù)涂布菌懸液，以使菌液均勻分布。

菌片制備好后當(dāng)日使用。

2、狀態(tài)調(diào)節(jié)

如需要，按照GB6529對試件進(jìn)行狀態(tài)調(diào)節(jié)，也可在標(biāo)準(zhǔn)正常室溫條件下進(jìn)行狀態(tài)天界和試驗。狀態(tài)調(diào)節(jié)的方法應(yīng)記錄在試驗報告中。

3、試驗設(shè)定

調(diào)節(jié)控制桿上配重，使試驗指施加到瓊脂上的力值為3N±0.02N。

將一個瓊脂培養(yǎng)皿放在轉(zhuǎn)盤上。

4、材料應(yīng)用

用下列計數(shù)：采用一個由內(nèi)、外環(huán)組成的圓形砝碼，總重800g±1g對材料施加標(biāo)準(zhǔn)的繃緊力。將圓柱放在內(nèi)環(huán)中央，再將試件覆蓋在圓柱體和內(nèi)環(huán)上，將除去貼附紙后的菌片染菌面向下放在試件上。zui后在聚氨酯膜上覆蓋一層HDPE膜，向下推緊外環(huán)，使三層材料牢固的加在兩個環(huán)之間。

5、試驗

將上述環(huán)組件輕輕搭放在*個去下蓋子的瓊脂培養(yǎng)皿上，鋼環(huán)自由懸放于旋轉(zhuǎn)盤的外面，將試驗指置于皿口內(nèi)測的HDPE膜上，這樣試件可與瓊脂表面接觸。試驗指按上述規(guī)定施加3N壓力，是儀器運行15min。

15min后立即取下環(huán)套件放在一邊。

從旋轉(zhuǎn)盤上取下*個培養(yǎng)皿并放上皿蓋。馬上將第二個培養(yǎng)皿和環(huán)套件放在旋轉(zhuǎn)盤上。

對后面的四個培養(yǎng)皿用同一個環(huán)套組件執(zhí)行上述步驟。

五個培養(yǎng)皿完成試驗后，取下菌片并棄去，將試件反轉(zhuǎn)，上面朝下用HDPE膜覆蓋。

在第六個培養(yǎng)皿上操作15min,即完成*個平行試驗組。

其余4片試件同樣按上述方法各運行六個培養(yǎng)皿各15min，每片試件使用一片新鮮制備的菌片。

如果瓊脂表面聚有液體，將其置于潔凈臺上干燥，將各瓊脂培養(yǎng)皿加蓋置于36℃±1℃培養(yǎng)48h。

計數(shù)每只培養(yǎng)皿中*菌落數(shù)，培養(yǎng)皿中心15min半徑區(qū)域內(nèi)的菌落數(shù)不計。

如果右一個皿或多個皿的計數(shù)大于750CFU（不包括上述的培養(yǎng)皿中心15min半徑區(qū)域內(nèi)的菌落數(shù)），可重新驚醒試驗。如果重新試驗仍有一個或多個皿計數(shù)大于750CFU，表明該材料不可能具有足夠的屏障特性，可終止試驗。

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