蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司
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更新時間：2023-06-21 08:16:48瀏覽次數(shù)：123次
聯(lián)系我時，請告知來自 儀表網(wǎng)骨髓間充質(zhì)干細胞在誘導(dǎo)培養(yǎng)基的作用下，會逐漸向軟骨細胞方向分化,軟骨細胞外具有一層富含蛋白多糖的基質(zhì)，是成軟骨分化的標志物，可被阿利辛藍染成藍綠色。骨髓間充質(zhì)干細胞成軟骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基適用于骨髓間充質(zhì)干細胞成軟骨誘導(dǎo)，能提高誘導(dǎo)效率。產(chǎn)品特點：產(chǎn)品性能穩(wěn)定，可提高骨髓間充質(zhì)干細胞成軟骨誘導(dǎo)效率;同時適用于骨髓間充質(zhì)干細胞平面誘導(dǎo)和三維誘導(dǎo);含染色液，方便使用；即用型產(chǎn)品，開封即可使用，更省時省力。
骨髓間充質(zhì)干細胞成軟骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基
產(chǎn)品簡介
骨髓間充質(zhì)干細胞在誘導(dǎo)培養(yǎng)基的作用下，會逐漸向軟骨細胞方向分化,軟骨細胞外具有一層富含蛋白多糖的基質(zhì)，是成軟骨分化的標志物，可被阿利辛藍染成藍綠色。骨髓間充質(zhì)干細胞成軟骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基適用于骨髓間充質(zhì)干細胞成軟骨誘導(dǎo)，能提高誘導(dǎo)效率。
骨髓間充質(zhì)干細胞成軟骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基
產(chǎn)品特點：
（以下步驟僅供參考，詳情參見說明書）
1. 間充質(zhì)干細胞的準備:
將對數(shù)生長期的細胞消化下來計數(shù)，取3×105個細胞轉(zhuǎn)移到15mL離心管中，250g離心4min。
棄上清，加入0.5mL成軟骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基基礎(chǔ)液，重懸細胞，150g離心5min。小心棄去上清，加入0.5mL成軟骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)液，重懸細胞，150g離心5min。
將15mL離心管的管蓋稍稍旋開，放置于37℃，5% CO2培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)。
2. 細胞分化誘導(dǎo):
24h后觀察細胞沉淀形變團聚的情況，如有明顯的變化，則小心輕柔地撥動管底，嘗試讓細胞團脫離管底，全部浸潤在誘導(dǎo)液中。
置于37℃，5% CO2培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)約21天，通常每2天更換一次新鮮配制的成軟骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)液。注意觀察細胞團成球情況及表面光滑度，決定終止細胞誘導(dǎo)的時間，并進行染色鑒定。
3. 染色鑒定
a)軟骨球固定：將軟骨球從離心管中轉(zhuǎn)移至EP管，并使用1×PBS清洗兩次，最后置于適量的4%中性中。
b)石蠟包埋切片：軟骨球經(jīng)石蠟包埋后切片。
c)阿利辛藍染色：將石蠟切片脫蠟，使用阿利辛藍染液染色30min，用自來水流水沖洗2min，蒸餾水沖洗1次。
d)誘導(dǎo)評估：顯微鏡下觀察成軟骨染色效果，并進行圖像采集和誘導(dǎo)評估。誘導(dǎo)成功時，軟骨組織中的內(nèi)酸性粘多糖可被阿利辛藍染成藍綠色。
NOTE: 間充質(zhì)干細胞的成軟骨分化水平因細胞類型、細胞供體來源，培養(yǎng)條件、細胞代次、細胞狀態(tài)和分化時間等因素而異。
| 舉例說明：成軟骨誘導(dǎo)步驟（平面誘導(dǎo)）
（以下步驟僅供參考，詳情參見說明書）
1. 將對數(shù)生長期的細胞消化下來計數(shù)，成軟骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基細胞重懸細胞，離心后調(diào)整細胞密度密度1-2.0×107cells/mL。
2. 20μL懸滴到24孔板。（20μL含有4×105細胞）。37℃培養(yǎng)3h使細胞貼壁。
3. 補充200uL誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基正常培養(yǎng)，每隔2-3天換液一次。按照以上換液頻率誘導(dǎo)21-28天，并注意觀察細胞形態(tài)變化。
4. 細胞固定：吸去培養(yǎng)基使用適量1×PBS清洗一次，棄去后取適量4%中性覆蓋培養(yǎng)器皿底面，室溫固定30-60min，棄去固定液再使用1×PBS清洗兩次。
5. 阿利新藍染色：向清洗干凈的誘導(dǎo)孔內(nèi)加入適量染色液，避光靜置染色30min。吸去阿利新藍染色液，用1×PBS清洗兩次，并加入適量1×PBS避免細胞干燥。
6. 誘導(dǎo)評估：顯微鏡下觀察成軟骨染色效果，并進行圖像采集和誘導(dǎo)評估。誘導(dǎo)成功時，軟骨組織中的內(nèi)酸性粘多糖可被阿利辛藍染成藍綠色。
NOTE:間充質(zhì)干細胞的成軟骨分化水平因細胞類型、細胞供體來源，培養(yǎng)條件、細胞代次、細胞狀態(tài)和分化時間等因素而異。
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