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脂肪間充質(zhì)干細胞成軟骨誘導(dǎo)分化試劑盒

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更新時間：2023-06-21 08:25:28瀏覽次數(shù)：327次

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蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司

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產(chǎn)品簡介

脂肪間充質(zhì)干細胞成軟骨誘導(dǎo)分化試劑盒產(chǎn)品性能穩(wěn)定，可提高脂肪間充質(zhì)干細胞成軟骨誘導(dǎo)效率；同時適用于脂肪間充質(zhì)干細胞平面誘導(dǎo)和三維誘導(dǎo)；該產(chǎn)品屬于即用型產(chǎn)品，內(nèi)含染色液，開封即可使用，簡單、快捷、方便。

詳細介紹

脂肪間充質(zhì)干細胞成軟骨誘導(dǎo)分化試劑盒

脂肪間充質(zhì)干細胞成軟骨誘導(dǎo)分化試劑盒規(guī)格： 脂肪間充質(zhì)干細胞誘導(dǎo)分化成軟骨試劑

質(zhì)檢標準 pH：7.2~7.4

內(nèi)毒素含量：＜10 EU/mL

生物安全：細菌、真菌、支原體檢測陰性

質(zhì)量檢測：誘導(dǎo)測試合格

| 檢驗原理

阿利辛藍廣泛用于酸性多糖的染色，如軟骨或組織中的糖胺聚糖和細胞分泌的外被多糖的染色等。干細胞在誘導(dǎo)培養(yǎng)基的作用下，會逐漸向軟骨細胞方向分化。軟骨細胞外具有一層富含蛋白多糖的基質(zhì)，是成軟骨分化的標志物，可被阿利辛藍染成藍綠色。

脂肪間充質(zhì)干細胞成軟骨誘導(dǎo)分化試劑盒使用說明

成軟骨誘導(dǎo)分化操作（平面誘導(dǎo)）

1. 細胞分化誘導(dǎo)

將對數(shù)生長期的細胞消化下來計數(shù)，成軟骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)液重懸細胞，離心后調(diào)整細胞密度密度1.0~2.0×10e7cells/mL。吸取20 μL細胞懸液（約2.0~4.0×10e5個細胞）懸滴至24孔板。置于37℃，5% CO2培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)2~3 h使細胞貼壁。 2~3 h后補充1 mL成軟骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)液正常培養(yǎng)。每隔2~3天換液一次。按照以上換液頻率誘導(dǎo)21~28天，并注意觀察細胞形態(tài)變化。

2. 染色鑒定

2.1 細胞固定吸去培養(yǎng)基使用適量 1×PBS 清洗一次，棄去后取適量 4%中性覆蓋培養(yǎng)器皿底面，室溫固定 30~60 min 后，棄去固定液再使用 1×PBS 清洗兩次。

2.2 阿利辛藍染色向清洗干凈的誘導(dǎo)孔內(nèi)加入適量染色液，避光靜置染色 30 min。吸去阿利辛藍染色液，用 1×PBS 清洗兩次，并加入適量 1×PBS 避免細胞干燥。

2.3 誘導(dǎo)評估顯微鏡下觀察成軟骨染色效果，并進行圖像采集和誘導(dǎo)評估。誘導(dǎo)成功時，軟骨組織中的內(nèi) 酸性粘多糖可被阿利辛藍染成藍綠色。

成軟骨誘導(dǎo)分化操作（三維培養(yǎng)）

1. 干細胞的準備

將對數(shù)生長期的細胞消化下來計數(shù)，取 3×10e5 個細胞轉(zhuǎn)移到 15 mL 離心管中，250 g 離心 4 min。棄上清，加入 0.5 mL 成軟骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基預(yù)混液，重懸細胞，150 g 離心 5 min。小心棄去上清，加入 0.5 mL 成軟骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基誘導(dǎo) 液，重懸細胞，150 g 離心 5 min。將 15 mL 離心管的管蓋稍稍旋開，放置于 37℃，5% CO2培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)。

2. 細胞分化誘導(dǎo)

24 h 后觀察細胞沉淀形變團聚的情況，如有明顯的變化，則小心輕柔地撥動管底，嘗試讓細胞團脫離管底，全部浸潤在誘導(dǎo)液中。置于 37℃，5% CO2培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)約 21 天，通常每 2 天更換一次新鮮配制的成軟骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)液。注意觀察細胞團成球情況及表面光滑度，決定終止細胞誘導(dǎo)的時間，并進行染色鑒定。

3. 染色鑒定

3.1 軟骨球固定將軟骨球從離心管中轉(zhuǎn)移至 EP 管，并使用 1 ×PBS 清洗兩次，最后置于適量的 4%中性中。

3.2 石蠟包埋切片軟骨球經(jīng)石蠟包埋后切片。

3.3 阿利辛藍染色將石蠟切片脫蠟和脫水，使用阿利辛藍染色液染色 30 min，用自來水沖洗 2 min，蒸餾水沖洗 1 次。

3.4 誘導(dǎo)評估顯微鏡下觀察成軟骨染色效果，并進行圖像采集和誘導(dǎo)評估。誘導(dǎo)成功時，軟骨組織中的內(nèi) 酸性粘多糖可被阿利辛藍染成藍綠色。

脂肪間充質(zhì)干細胞誘導(dǎo)成軟骨