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更新時間：2023-06-25 08:29:44瀏覽次數：162次
聯(lián)系我時，請告知來自 儀表網QuickShuttle 系列轉染試劑中的QuickShuttle-293 細胞轉染試劑屬于陽離子轉染試劑，具有高的效率、低毒和易于使用等特點，用于常規(guī)哺乳動物細胞系的瞬時轉染和穩(wěn)定細胞系構建。
QuickShuttle-293 HEK293細胞轉染試劑
貨號：KX0110044
含量：0.8 m
l 用途：用于各種 293 細胞的瞬時轉染和穩(wěn)定細胞系構建（立傳立轉）。
293細胞轉染試劑的使用 注意事項：
1. 質粒 DNA：請用能夠去除內毒素的方法制備高質量的質粒 DNA。
2. 稀釋液：0.85%（W/V）生理鹽水，用低內毒素純水配制，高壓消毒或除菌過濾。
3. 培養(yǎng)基：經過 DMEM、RPMI-1640 和 M199 等常規(guī)培養(yǎng)基測試，推薦使用含 5~10%牛血清的 DMEM，若轉染效果不理想可嘗試其它培養(yǎng)基。
4. 以 24 孔細胞板轉染實驗為例，推薦每孔低內毒素質粒 DNA 用量為 2µg、轉染試劑用量為 3~5µl，請 在正式實驗前根據不同細胞和不同培養(yǎng)基用報告基因進行優(yōu)化。
5. 立傳立轉要求使用生長旺盛的細胞，即細胞生長至 80-90%成片或剛長滿。若使用生長過老的細胞， 將明顯影響立傳立轉的效率。
6. 立傳立轉對細胞狀態(tài)要求較高，如果轉染效果不理想，可按 QuickShuttle-Basic 的轉染方法（詳見說明 書的P3 頁），在細胞貼壁后進行標準轉染操作。
293細胞轉染試劑的使用方法 ：
1. 將新鮮消化的 293 細胞接種到 24 孔細胞板中，每孔 1~2×105細胞，1ml 培養(yǎng)基。
備注：可在生長 旺盛的細胞傳代后直接按下述步驟 2~5 進行轉染實驗，無需 18~24 小時的等候時間。
2. 將 2μg 質粒 DNA 和 3~5μl 轉染試劑分別稀釋到 50μl 生理鹽水中。
備注：質粒 DNA 和轉染試劑的量需要根據不同培養(yǎng)基來優(yōu)化，但理論上不超出 1~2µg 和 3~5µl 范圍。
3. 合并上述兩溶液并混勻。備注：無需其它轉染試劑所需的 10~30 分鐘的等候時間。
4. 將上述復合物直接加入到細胞培養(yǎng)基中，用加樣器吸打混勻。備注：轉染復合物可直接加入含血清的 細胞培養(yǎng)基中進行轉染。
5. 將細胞板移至 37oC/5% CO2 孵箱中進行培養(yǎng)。備注：無需在轉染后 4~6 小時補加血清或更換培養(yǎng) 基。
6. 24~72 小時后根據實驗需要進行瞬時表達分析或穩(wěn)定細胞系加壓篩選。
7 QuickShuttle-Hela 轉染試劑適用于Hela 細胞。
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