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多肽常見問題匯總

時間:2023/3/8閱讀:766
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關(guān)于多肽的一個常見的誤解是多肽像蛋白質(zhì)一樣是不穩(wěn)定的。事實上,多肽比蛋白質(zhì)穩(wěn)定得多,由于兩個影響蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的要素不存在多肽合成中。這兩個要素是第三次折疊和蛋白酶的污染。

多肽只能經(jīng)過共價修飾或者肽鍵斷裂被毀壞。不像蛋白質(zhì)是從充溢各種蛋白酶的細(xì)胞里被純化,合成的多肽被蛋白酶污染的幾率是很小很小的。固拓生物在試驗中發(fā)現(xiàn)在中性pH條件下,大多數(shù)生物實驗的停止速度很慢。中性條件下細(xì)菌污染可能是一個嚴(yán)重的問題(由于多肽是細(xì)菌的一種良好的營養(yǎng)源)。因次,實驗里用到的溶劑過濾比多肽的穩(wěn)定更重要。


圖片



2

多肽濃度


稱重和紫外線吸收力是兩個常用的辦法。

b. 紫外線吸收性。假如您的多肽含有一個或殘基,多肽的定量剖析就變得愈加簡單。

這在小的親水性肽,這不是問題。在水溶液中,這些肽通常采用伸展構(gòu)象,一切的側(cè)鏈?zhǔn)峭暾┞队谌軇┲械?。但關(guān)于長的疏水性多肽,固拓生物試驗發(fā)現(xiàn)這種假定是不完整正確的。有時可察看到低水平聚合和折疊。出于這個緣由,我們以為,在0.1N NaOH中,在293 nm處的吸光度是,由于在此條件下,肽是完整變性的。它的缺陷是,用于濃度測定的樣品不能被恢復(fù)。

基于上面的討論,為了多肽的濃度的準(zhǔn)確測定,我們激烈倡議在你的多肽的N-或C-末端添加一個殘基。



人們經(jīng)常以為用乙?;王0坊謩e阻斷肽的兩端能增加肽的穩(wěn)定性,實踐上這是不正確的。



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多肽溶解度



肽的溶解度最終取決于它的序列。在能夠操作的條件,pH值可能是最重要的。固拓生物發(fā)現(xiàn),在許多狀況下,改動1-3個pH值單位能夠使十分穩(wěn)定的多肽完整溶解。過渡曲線通常是很峻峭的。在一個很窄的pH范圍內(nèi),溶液從混濁變得明澈。這可能是由于某些殘基電離狀態(tài)的改動,比方His。

關(guān)于難以溶解的肽,你能夠在有機(jī)溶劑中制備更高濃度的原液,例如DMS,并且在生物功用檢測期間稀釋肽。大多數(shù)的檢測能包容1-2%的DSMO,一些以至是5%。但是這并不是總是起作用的。一些肽當(dāng)從DMSO中稀釋時以至在更低濃度時匯集和沉淀。

                                                             

                                                             







                                    ▲岐昱      多肽合成儀


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