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廣州化興科創(chuàng)儀器設(shè)備有限公司


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HPLC常見問題和解決方法總匯

閱讀:445發(fā)布時間:2021-9-22

HPLC常見問題和解決方法總匯

壓力異常

操作壓力的變化往往是故障的征兆。從下表中找出所觀察到的現(xiàn)象,并在右側(cè)的列表中參考相應(yīng)的解決方法。

A、 沒有壓力顯示,沒有流動相流動

原 因解決方法
1、電源問題1、接通電源,開機(jī)
2、保險絲被燒壞2、更換保險絲
3、控制器設(shè)定不正確或設(shè)定失敗3、a、采取恰當(dāng)?shù)脑O(shè)定
b、修理或更換控制器
4、柱塞桿折斷4、更換柱塞桿
5、泵頭內(nèi)有空氣5、溶劑脫氣、啟動泵抽出空氣
6、流動相不足6、a、補(bǔ)充流動相
b、更換入口濾頭
7、單向閥損壞7、更換單向閥
8、漏液8、擰緊或更換手緊接頭

B、 流動相流動正常,但沒有壓力顯示

原 因解決方法
1、儀表損壞1、更換儀表
2、壓力傳感器損壞2、更換壓力傳感器

C、 壓力持續(xù)偏高

原 因解決方法
1、流速設(shè)定過高1、調(diào)整流速設(shè)定
2、柱前篩板堵塞2、a、在允許情況下反沖色譜柱
b、更換篩板
c、更換色譜柱
3、流動相使用不當(dāng)或緩沖鹽的結(jié)晶沉淀3、a、使用恰當(dāng)?shù)牧鲃酉?br>b、沖洗色譜柱
4、色譜柱選擇不當(dāng)4、選擇恰當(dāng)?shù)纳V柱
5、進(jìn)樣閥損壞5、清洗或更換進(jìn)樣閥
6、柱溫過低6、提高溫度
7、控制器失常7、修理或更換控制器
8、保護(hù)柱阻塞8、清洗或更換保護(hù)柱
9、在線過濾器阻塞9、清洗或更換在線過濾器

D、 壓力持續(xù)偏低

原 因解決方法
1、流速設(shè)定過低1、調(diào)整流速
2、系統(tǒng)漏液2、確定漏液位置并維修
3、色譜柱選擇不當(dāng)3、選擇恰當(dāng)?shù)纳V柱
4、柱溫過高4、降低溫度
5、控制器失常5、維修或更換控制器

E、 壓力不斷上升

原 因解決方法
1、見列表C1、見列表C

F、 壓力降為零

原 因解決方法
1、見列表A、B1、見列表A、B

G、 壓力不斷下降,但不回零

原 因解決方法
1、見列表D1、見列表D

H、 壓力波動

原 因解決方法
1、泵中有氣體1、a、溶劑脫氣
b、從泵中除去氣體
2、單向閥損壞2、更換單向閥
3、泵密封損壞3、更換泵密封
4、脫氣不充分4、a、溶劑脫氣
b、改變脫氣方法(使用在線脫氣法等)
5、系統(tǒng)漏液5、確定漏液位置并維修
6、使用梯度洗脫6、由于流動相粘度的變化引起的壓力波動

漏 液

通??梢酝ㄟ^擰緊或更換管路接頭來解決漏液的問題。但值得注意的是過份擰緊會導(dǎo)致金屬接頭的漏液和塑料接頭的磨損。如果通過稍微擰緊接頭不能解決漏液的問題,就必須將接頭取下,檢查是否損壞(例如,卡套損壞、密封表面有雜質(zhì));損壞的接頭應(yīng)該更換掉。

A、 接頭處漏液

原 因解決方法
1、接頭松動1、擰緊
2、接頭磨損2、更換
3、接頭過緊3、a、擰松,再重新擰緊
b、更換
4、接頭被污染4、a、拆下清洗
b、更換
5、部件不匹配5、使用同一品牌的配件

B、 泵漏液

原 因解決方法
1、單向閥松動1、a、擰緊單向閥(不必擰的過緊)
b、更換單向閥
2、接頭松動2、擰緊接頭(不必擰的過緊)
3、混合器密封損壞3、a、更換混合器密封
b、更換混合器
4、泵密封損壞4、維修或更換泵密封件
5、壓力傳感器損壞5、維修或更換壓力傳感器
6、脈沖阻尼器損壞6、更換脈沖阻尼器
7、比例閥損壞7、a、檢查隔膜,如果漏液立即更換
b、檢查手緊接頭,損壞的立即更換
8、放空閥的損壞8、a、擰緊放空閥
b、更換放空閥

C、 進(jìn)樣閥漏液

原 因解決方法
1、轉(zhuǎn)子密封損壞1、重新安裝或更換進(jìn)樣閥
2、定量環(huán)阻塞2、更換定量環(huán)
3、進(jìn)樣口密封松動3、調(diào)整
4、進(jìn)樣針頭尺寸不合適4、使用恰當(dāng)?shù)倪M(jìn)樣針
5、廢液管中產(chǎn)生虹吸5、保持廢液管高于廢液液面
6、廢液管阻塞6、更換或疏通廢液管

D、 色譜柱漏液

原 因解決方法
1、尾端接頭松動1、擰緊接頭
2、卡套內(nèi)有填料2、拆下、清洗卡套、重新安裝
3、篩板厚度不合適3、使用合適的篩板(參考下表)

篩板選擇指導(dǎo)
物質(zhì)粒徑篩板孔徑
3-4u0.5u
5-20u2u

E、 檢測器漏液

原 因解決方法
1、流通池墊片損壞1、a、避免過大的背景壓力(壓力降)
b、更換墊片
2、流通池窗破碎2、更換窗口
3、手緊接頭漏液3、擰緊或更換
4、廢液管阻塞4、更換廢液管
5、流通池阻塞5、重新安裝或更換


液相色譜系統(tǒng)的許多問題都能在譜圖上反映出來。其中有一些問題可以通過改變設(shè)備參數(shù)得到解決;而其他的問題必須通過修改操作程序來解決。對于色譜柱和流動相的正確選擇是得到好的色譜圖的關(guān)鍵。

A、 峰拖尾

原 因解決方法
1、篩板阻塞1、a、反沖色譜柱
b、更換進(jìn)口篩板
c、更換色譜柱
2、色譜柱塌陷2、填充色譜柱
3、干擾峰3、a、使用更長的色譜柱
b、改變流動相或更換色譜柱
4、流動相PH選擇錯誤4、調(diào)整PH值。對于堿性化合物,低PH值更有利于得到對稱峰
5、樣品與填料表面的溶化點發(fā)生反應(yīng)圖5、a、加入離子對試劑或堿性揮發(fā)性修飾劑
b、更改色譜柱

B、 峰前延

原 因解決方法
1、柱溫低1、升高柱溫
2、樣品溶劑選擇不恰當(dāng)2、使用流動相作為樣品溶劑
3、樣品過載3、降低樣品含量
4、色譜柱損壞4、見A1、A2

C、 峰分叉

原 因解決方法
1、 保護(hù)柱或分析柱污染
1、取下保護(hù)柱再進(jìn)行分析。如果必要更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞,拆下來清洗。如果問題仍然存在,可能是柱子被強(qiáng)保留物質(zhì)污染,運用適當(dāng)?shù)脑偕胧H绻麊栴}仍然存在,入口可能被阻塞,更換篩板或更換色譜柱。
2、樣品溶劑不溶于流動相2、改變樣品溶劑。如果可能采取流動相作為樣品溶劑。

D、 峰變形

原 因解決方法
1、樣品過載1、減少樣品載量

E、 早出的峰變形

原 因解決方法
1、樣品溶劑選擇不恰當(dāng)1、a、減少進(jìn)樣體積
b、運用低極性樣品溶劑

F、 早出的峰拖尾程度大于晚出的峰

原 因解決方法
1、柱外效應(yīng)1、a、調(diào)整系統(tǒng)連接(使用更短、內(nèi)徑更小的管路)
b、使用小體積的流通池

G、 K’增加時,脫尾更嚴(yán)重

原 因解決方法
1、二級保留效應(yīng),反相模式1、a、加入三乙胺(或堿性樣品)
b、加入乙酸(或酸性樣品)
c、加入鹽或緩沖劑(或離子化樣品)
d、更換一支柱子
2、二級保留效應(yīng),正相模式2、a、加入三乙胺(或堿性樣品)
b、加入乙酸(或酸性樣品)
c、加入水(或多官能團(tuán)化合物)
d、試用另一種方法
3、二級保留效應(yīng),離子對3、加入三乙胺(或堿性樣品)

H、 酸性或堿性化合物的峰拖尾

原 因解決方法
1、緩沖不合適1、a、使用濃度50-100mM的緩沖液
b、使用Pka等于流動相PH值的緩沖液

I、 額外的峰

原 因解決方法
1、樣品中有其他組份1、正常
2、前一次進(jìn)樣的洗脫峰2、a、增加運行時間或梯度斜率
b、提高流速
3、空位或鬼峰3、a、檢查流動相是否純凈
b、使用流動相作為樣品溶劑
c、減少進(jìn)樣體積

J、 保留時間波動

原 因解決方法
1、溫控不當(dāng)1、調(diào)好柱溫
2、流動相組分變化2、防止變化(蒸發(fā)、反應(yīng)等)
3、色譜柱沒有平衡3、在每一次運行之前給予足夠的時間平衡色譜柱

K、 保留時間不斷變化

原 因解決方法
1、流速變化1、重新設(shè)定流速
2、泵中有氣泡2、從泵中除去氣泡
3、流動相選擇不恰當(dāng)3、a、更換合適的流動相
b、選擇合適的混合流動相

L、 基線漂移

原 因解決方法
1、柱溫波動。(即使是很小的溫度變化都會引起基線的波動。通常影響示差檢測器、電導(dǎo)檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器。)1、控制好柱子和流動相的溫度,在檢測器之前使用熱交換器
2、流動相不均勻。(流動相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移。)2、使用HPLC級的溶劑,高純度的鹽和添加劑。流動相在使用前進(jìn)行脫氣,使用中使用氦氣。
3、流通池被污染或有氣體3、用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池。如有需要,可以用1N的硝酸。(不要用鹽酸)
4、檢測器出口阻塞。(高壓造成流通池窗口破裂,產(chǎn)生噪音基線)4、取出阻塞物或更換管子。參考檢測器手冊更換流通池窗。
5、流動相配比不當(dāng)或流速變化5、更改配比或流速。為避免這個問題可定期檢查流動相組成及流速。
6、柱平衡慢,特別是流動相發(fā)生變化時6、用中等強(qiáng)度的溶劑進(jìn)行沖洗,更改流動相時,在分析前用10-20倍體積的新流動相對柱子進(jìn)行沖洗。
7、流動相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成7、檢查流動相的組成。使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級的溶劑
8、樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)(高K’值)以饅頭峰樣被洗脫出,從而表現(xiàn)出一個逐步升高的基線。8、使用保護(hù)柱,如有必要,在進(jìn)樣之間或在分析過程中,定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。
9、使用循環(huán)溶劑,但檢測器未調(diào)整。9、重新設(shè)定基線。當(dāng)檢測器動力學(xué)范圍發(fā)生變化時,使用新的流動相。
10、檢測器沒有設(shè)定在吸收波長處。10、將波長調(diào)整至吸收波長處

M、 基線噪音(規(guī)則的)

原 因解決方法
1、在流動相、檢測器或泵中有空氣1、流動相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去檢測器或泵中的空氣。
2、漏液
2、見第三部分。檢查管路接頭是否松動,泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要,更換泵密封。
3、流動相混合不*3、用手搖動使混合均勻或使用低粘度的溶劑
4、溫度影響(柱溫過高,檢測器未加熱)4、減少差異或加上熱交換器
5、在同一條線上有其他電子設(shè)備5、斷開LC、檢測器和記錄儀,檢查干擾是否來自于外部,加以更正。
6、泵振動6、在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器

N、 基線噪音(不規(guī)則的)

原 因解決方法
1、 漏液
1、見第三部分。檢查接頭是否松動,泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要,更換密封。檢查流通池是否漏液。
2、流動相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成2、檢查流動相的組成。
3、流動相各溶劑不相溶3、選擇互溶的流動相
4、檢測器/記錄儀電子元件的問題4、斷開檢測器和記錄儀的電源,檢查并更正。
5、系統(tǒng)內(nèi)有氣泡5、用強(qiáng)極性溶液清洗系統(tǒng)
6、檢測器內(nèi)有氣泡6、清洗檢測器,在檢測器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器
7、流通池污染(即使是極少的污染物也會產(chǎn)生噪音。)7、用1N的硝酸(不能用磷酸)清洗流通池
8、檢測器燈能量不足8、更換燈
9、色譜柱填料流失或阻塞9、更換色譜柱
10、流動相混合不均勻或混合器工作不正常10、維修或更換混合器,在流動相不走梯度時,建議不使用泵的混合裝置

O、 寬峰

原 因解決方法
1、流動相組成變化1、重新制備新的流動相
2、流動相流速太低2、調(diào)節(jié)流速
3、漏液(特別是在柱子和檢測器之間)3、見section 3。檢查接頭是否松動、泵是否漏液、是否有鹽析出以及不正常的噪音。如果必要更換密封。
4、檢測器設(shè)定不正確4、調(diào)整設(shè)定
5、柱外效應(yīng)影響
a、柱子過載
b、檢測器對反應(yīng)時間或池體積響應(yīng)過大
c、柱子與檢測器之間的管路太長或管路內(nèi)徑太大
d、記錄儀響應(yīng)時間太長
5、
a、 小體積進(jìn)樣(例如:10ul而不是100ul)以1:10或1:100的比例稀釋樣品
b、減少響應(yīng)時間或使用更小的流通池
c、 使用內(nèi)徑為0.007-0.01的短管路
d、減少響應(yīng)時間
6、緩沖液濃度太低6、增加濃度
7、保護(hù)柱污染或失效7、更換保護(hù)柱
8、色譜柱污染或失效,塔板數(shù)較低8、更換同樣類型的色譜柱。如果新柱子可以提供對稱的色譜峰,則用強(qiáng)溶劑沖洗舊柱子。
9、柱入口塌陷9、打開柱入口,*塌陷或更換柱子
10、呈現(xiàn)兩個或多個未被*分離的物質(zhì)的峰10、選擇其它類型的色譜柱以改善分離效果
11、柱溫過低11、提高柱溫。除非特殊情況,溫度不宜超過75℃
12、檢測器時間常數(shù)太大12、使用較小的時間常數(shù)

P、 分離度降低

原 因解決方法
1、流動相污染或變質(zhì)(引起, 保留時間變化)1、重新配置流動相
2、保護(hù)柱或分析柱阻塞
2、去掉保護(hù)柱進(jìn)行分析。如果必要則更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞,可進(jìn)行反沖。如果問題仍然存在色譜柱可能被強(qiáng)保留的污染物損壞,建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕绦?。如果問題仍然存在,進(jìn)口可能阻塞了,更換入口處的篩板或更換色譜柱。

Q、 所有的峰面積都太小

原 因解決方法
1、檢測器衰減設(shè)定過高1、減少衰減的設(shè)定
2、檢測器時間常數(shù)設(shè)定太大2、設(shè)定較小的時間常數(shù)
3、進(jìn)樣量太少3、增大進(jìn)樣量
4、記錄儀連接不當(dāng)4、使用正確的連接

R、 所有的峰面積都太大

原 因解決方法
1、檢測器衰減設(shè)定過低1、采取較大的衰減
2、進(jìn)樣過多2、減少進(jìn)樣量
3、記錄儀連接不正確3、正確連接記錄儀


以下問題在使用進(jìn)樣閥過程中有可能發(fā)生。

A、 手動進(jìn)樣閥,轉(zhuǎn)動不靈

原 因解決方法
1、轉(zhuǎn)子密封損壞1、更換或調(diào)整轉(zhuǎn)子密封
2、轉(zhuǎn)子太緊2、調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度

B、 手動進(jìn)樣閥,載樣困難

原 因解決方法
1、進(jìn)樣閥安裝不當(dāng)1、重新安裝
2、定量環(huán)阻塞2、清洗或更換定量環(huán)
3、進(jìn)樣器污染3、清洗或更換進(jìn)樣器
4、管路阻塞4、清洗或更換管路

C、 自動進(jìn)樣閥,不能轉(zhuǎn)動

原 因解決方法
1、無壓力(或電源)1、提供恰當(dāng)?shù)膲毫Γ娫矗?/td>
2、轉(zhuǎn)子太緊2、調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度
3、進(jìn)樣閥安裝不當(dāng)3、重新安裝

D、 自動進(jìn)樣閥,其它問題

原 因解決方法
1、阻塞1、清洗或更換阻塞部件
2、機(jī)械故障2、見隨機(jī)維修手冊
3、控制器故障3、維修或更換控制器


由氣味、景象和聲音可以發(fā)現(xiàn)的問題

你需要運用你所有的感官去發(fā)現(xiàn)液相色譜的問題。你養(yǎng)成習(xí)慣,每天花上幾分鐘運用你的感官(除了味覺)來“感覺"你的液相色譜是否存在問題,這樣可以幫助你迅速找到問題所在。例如:在你看到漏液之前,你可能首先聞到它的氣味。大部分的問題是可以通過眼睛看到。

A、 溶劑的氣味

原 因解決方法
1、漏液1、見section 3
2、濺出2、a、檢查廢液瓶是否已滿
b、找到濺出的部位并清洗干凈

B、 熱氣味

原 因解決方法
1、儀器過熱1、a、檢查并調(diào)節(jié)通風(fēng)設(shè)施
b、檢查并調(diào)節(jié)溫度設(shè)定
c、關(guān)掉儀器,查找維修手冊

C、 讀數(shù)不正常

原 因解決方法
1、壓力不正常1、見section 2
2、柱溫箱問題2、
a、檢查并調(diào)節(jié)設(shè)定
b、參照用戶手冊
3、檢測器燈失效3、更換燈

D、 燈警告

原 因解決方法
1、壓力超出極限值1、
a、檢查是否阻塞
b、檢查并調(diào)節(jié)極限值的設(shè)定
2、其它警示燈2、見用戶手冊

E、 警告音

原 因解決方法
1、溶劑泄漏/濺出1、找到并解決
2、其它警告音2、見用戶手冊

F、 刺耳的短音或長音

原 因解決方法
1、軸承失效1、見用戶手冊
2、潤滑不夠2、進(jìn)行恰當(dāng)?shù)臐櫥?/td>
3、機(jī)械故障3、見用戶手冊


常見故障及日常維護(hù)
下表中列出了液相色譜常見的一些問題,右側(cè)中則列出的日常維護(hù)的方法可以減少問題出現(xiàn)的頻率。括號中的數(shù)字是建議進(jìn)行維護(hù)的時間間隔。用戶手冊則提供您更多的維護(hù)方法。

溶劑瓶
問 題維 護(hù)
1、進(jìn)口篩板阻塞1、
a、更換(3-6個月)
b、過濾流動相,0.5u濾膜
2、氣泡2、流動相脫氣

問 題維 護(hù)
1、氣泡1、流動相脫氣
2、泵密封損壞2、更換(3個月)
3、單向閥損壞3、過濾流動相,運用在線過濾,準(zhǔn)備備用單向閥
進(jìn)樣閥
問 題維 護(hù)
1、轉(zhuǎn)子密封損壞1、
a、不要擰的過緊
b、過濾樣品
色譜柱
問 題維 護(hù)
1、篩板阻塞1、a、過濾流動相
b、過濾樣品
c、運用在線過濾或保護(hù)柱
2、柱頭塌陷2、a、避免使用PH>8的流動相(針對大部分硅膠的柱子)
b、使用保護(hù)柱
c、使用預(yù)柱(飽和色譜柱)
檢測器
問 題維 護(hù)
1、燈失效,檢測器響應(yīng)降低,噪音增大1、更換(6個月)或準(zhǔn)備備用燈
2、流通池有氣泡2、a、保持流通池清潔
b、池后使用反壓抑制器
c、流動相脫氣
一般
問 題維 護(hù)
1、腐蝕/摩擦損壞1、在不使用時保持系統(tǒng)緩沖液的清潔
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