上海蟻霖科學(xué)儀器有限公司
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閱讀：153發(fā)布時間：2021-11-8
材料與方法
低溫離心機(jī)( Eppendorf) ，渦旋振蕩器( 海門其林貝爾) ，TissueLyser II 85300［QIAGEN，BGISEQ-500( 華大基因) ］，Agilent 2100 Bioanalyzer( Invitrogen) ，紫外分光光度計( NanoDropTM) 。清瘟敗毒飲全成分每劑含生石膏 15 g、生地黃 7． 5 g、水牛角 15 g、黃連2． 5 g、梔子5 g、桔梗5 g、黃芩5g、知母 5 g、赤芍 5 g、玄參 5 g、連翹 5 g、甘草 5 g、丹皮 5 g、竹葉 5 g，每劑用蒸餾水 60 ml 溶解即每 ml 含生藥 1． 5 g。 Trizol 試劑( Invitrogen) ，去離子水 ( Ambion) ，、異戊醇、異丙醇( 均為西隴化工) 。各組脾組織標(biāo)本提取總 ＲNA 后，用帶有Oligo( dT) 的磁珠富集 mＲNA，并于提取到的 mＲNA 中加入Fragmentation Buffer 使其片斷成為短片段，再 以 片 斷 后 的mＲNA 為模板，用六堿基隨機(jī)引物( random hexamers) 合成cDNA 鏈，并加入緩沖液、dNTPs、ＲNase H 和 DNA polymerase I 合成 cDNA 第二鏈，經(jīng)過 QiaQuick PCＲ 試劑盒純化并加 EB 緩沖液洗脫經(jīng)末端修復(fù)、加堿基 A，加測序接頭，再經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳回收目的大小片段，并進(jìn)行 PCＲ 擴(kuò)增，從而完成整個文庫制備工作，構(gòu)建好的文庫用 BGISEQ-500 進(jìn)行測序。
結(jié)果
A、B 組大鼠脾組織 TNF 信號通路相關(guān)差異基因表達(dá)比較，兩組同時上調(diào)的基因有 19 個，同時下調(diào)的基因有 8 個，下調(diào)轉(zhuǎn)正常的基因有 1 個，正常轉(zhuǎn)上調(diào)的基因有 5 個，上調(diào)轉(zhuǎn)為正?；蛴?7 個，正常轉(zhuǎn)下調(diào)基因有 13 個。膿毒癥是一種由感染引起的復(fù)雜免疫系統(tǒng)紊亂，常危及患者生命。目前，傳統(tǒng)的廣譜抗感染聯(lián)合臟器支持治療費用高昂，給個人及社會造成巨大的醫(yī)療負(fù)擔(dān)。相對于西醫(yī)藥治療，中醫(yī)中藥如對該病治療具有效果，則更具有效益比。相關(guān)研究顯示，膿毒癥早期予以中藥干預(yù)治療可預(yù)防膿毒癥相關(guān)性胃腸道疾病，有利于減少機(jī)械通氣時間及病死率。
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