1 材料與方法
1． 1 材料
1． 1． 1 菌株和試劑
黃原膠高產(chǎn)菌株 XccYH1 由本實驗室通過基因工程方法獲得?？股?購自 Sigma 公司。
1． 1． 2 儀器
PB － 10 pH 計( SAＲTOＲIUS AG) ; MP2002 電子天平( 上海恒平科學(xué)儀器有限公司) ; DHP － 9052 型電熱恒溫培養(yǎng)箱( 上海一恒科學(xué)儀器有限公司) ; SW － CJ － 2FD 潔凈工作臺( 蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司) ; ZHWY200B 恒溫培養(yǎng)振蕩器( 上海智城分析儀器制造有限公司) ; LS － B50L －Ⅱ立式壓力蒸汽滅菌鍋( 江陰濱江醫(yī)療設(shè)備有限公司) ; QL －902 漩渦混合儀( 海門市其林貝爾儀器制造有限公司) ; DHG－ 9240 鼓風(fēng)干燥箱( 上海一恒科學(xué)儀器有限公司) 。
1． 2 方法
1． 2． 1 野油菜黃單胞菌胞外多糖的檢測
將菌株 XccYH1接種于 NYG 液體培養(yǎng)基( 5 g /L 蛋白胨，3 g /L 酵母粉，20 g /L甘油) 中，30 ℃ ( 200 r/min) 搖床培養(yǎng) 24 h 后，調(diào)整菌體濃度至 OD600約為 1． 0，并按 1% 的比例接種至含 4% 碳源的 NYG 中( 含相應(yīng)抗生素) ，30 ℃ ( 200 r/min) 搖床培養(yǎng) 5 d后，加入 4 倍體積的無水乙醇沉淀胞外多糖，邊注入邊攪拌，然后將絮狀沉淀物取出后置于 42 ℃ 充分干燥，所得即為黃原膠。以黃原膠重量作為衡量發(fā)酵效果的標(biāo)準(zhǔn)。
1． 2． 2 碳源對黃原膠發(fā)酵的影響
以淀粉、葡萄糖、麥芽糖和蔗糖作為培養(yǎng)基碳源，考察碳源對黃原膠發(fā)酵的影響。在NYG 中加入 4% 淀粉、4% 葡萄糖、4% 麥芽糖和 4% 蔗糖作為培養(yǎng)基，按照“1． 2． 1"方法進行黃原膠發(fā)酵，每組發(fā)酵設(shè)計平行做 3 個。
2 結(jié)果與分析
為進一步提高基因工程菌 XccYH1 的黃原膠產(chǎn)量，首先探索不同碳源對黃原膠產(chǎn)量的影響。以淀粉、葡萄糖和麥芽糖為碳源時，黃原膠產(chǎn)量無顯著性差異，而以蔗糖為碳源時，所產(chǎn)的黃原膠產(chǎn)量，后續(xù)試驗中以蔗糖作為碳源測定黃原膠產(chǎn)量。在低濃度碳源( 2% ～ 6% ) 時，黃原膠產(chǎn)量隨著濃度的增加而顯著增加，當(dāng)添加 6% 蔗糖時黃原膠 產(chǎn) 量 ，達20． 3 g /L。但繼續(xù)提高碳源濃度到 8% ，顯著抑制菌體生長，也沒有檢測到黃原膠。因此，碳源濃度為 6% 時，黃原膠產(chǎn)量?；蚬こ叹姆€(wěn)定性往往是能否進入工業(yè)化應(yīng)用的重要評價指標(biāo)，在非抗生素壓力條件下穩(wěn)定性好的菌種將具有更好的應(yīng)用前景，該研究將 XccYH1 菌株在無抗性的培養(yǎng)基上連續(xù)劃線傳 10 代后，菌落形態(tài)沒有差異，進一步考察了傳不同代數(shù)時黃原膠的產(chǎn)量。
3 結(jié)論與討論
野油菜黃單胞菌( Xcc) 是十字花科植物黑腐病菌的病原菌，在范圍內(nèi)引起植物病害，造成重大的經(jīng)濟損失。Xcc在植物侵染過程中產(chǎn)生眾多的致病因子，包括蛋白酶、纖維素酶、胞外多糖等，因此 Xcc 也是研究細菌與植物互作的模式菌種。另一方面，Xcc 產(chǎn)生的胞外多糖( 黃原膠) 又具有重要的工業(yè)價值，在食品、藥品、化妝品等諸多領(lǐng)域中有廣泛的應(yīng)用。
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