胰脂肪酶是一種由動物或人類胰腺分泌的水溶性脂肪分解酶，在甘油三酯的消化中發(fā)揮著重要胰脂肪酶是一種由動物或人類胰腺分泌的水溶性脂肪分解酶，在甘油三酯的消化中發(fā)揮著重要發(fā)生率的逐年上升，藥物治療成為治療肥胖癥的有效手段之一。
１ 材料與方法
１．１ 儀器與軟件
ＴＵ－１８１０紫外可見分光光 度計（北 京 普 析 通 用 儀 器 有 限 責(zé) 任 公 司）；ＭｕｌｔｉＳｋａｎＦＣ酶標(biāo)儀［賽默飛世爾科技（中國）有限公司］；QL-866渦旋混合器（海門市其林貝爾儀器制造有限公司）；ＤＺＫＷ－４電熱恒溫水浴鍋（北 京 中 興 偉 業(yè)儀器有限 公 司）；ＦＡＩ６０４萬 分 之 一 天 平（上 海 天 平儀器廠）；ＪＡ５００３Ｂ千分之一天平（上海越平儀器有限公司）；ＳｉＧｍＡ 高速冷凍離心機(jī)（北京五洲東方科技發(fā) 展 有 限 公 司）；Ｂｒａｎｄ 移 液 槍 （德 國 Ｂｒａｎｄ 公司）；ＫＱ５２００Ｅ*（昆山市超聲儀器有限公司）；ＳＴＡＲＴＥＲ２１００ＰＨ 計（深圳市展華儀器儀表 有 限 公 司 ）；ＧａｓｔｒｏｐｌｕｓＴＭ （Ｖｅｒｓｉｏｎ９．５．０００４ＳｉｍｕｌａｔｉｏｎｓＰｌｕｓＩｎｃ．，Ｌａｎｃａｓｔｅｒ，ＣＡ，ＵＳＡ）；ＡＤＭＥＴＰｒｅｄｉｃｔｏｒＴＭ軟件（Ｖｅｒｓｉｏｎ８．１．０．０）。
１．２ 試 劑
豬 胰 脂 肪 酶 （上 海 源 葉 生 物 有 限 公司）；對硝基苯基棕櫚酸酯（Ｐ－ＮＰＰ）（≥９８％，阿法埃莎化學(xué)有限公司）；脫氧膽酸鈉（純度：＞９９．０％，上海江萊 生 物 科 技 有 限 公 司）；二 甲 基 亞 砜（ＤＭＳＯ）（北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司）；*、異丙醇、高 氯 酸（北 京 化 工 廠）、氫 氧 化 鈉（天 津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司）均 為 分 析 純；奧 利 司 他（純度：≥９８％，中山萬漢醫(yī)藥科技有限公司）、新利司他（純度：≥９８％，上海源葉生物科技有限公司）；娃哈哈飲用純凈水（杭州集團(tuán)娃哈哈有限公司）。
１．３ 方法
１．３．１ 胰脂肪酶溶液的制備
精密稱定胰脂肪酶１００ｍｇ，于 ５０ ｍＬ 離 心 管，加 入 １０ ｍＬ 冷 的 ５０ｍｍｏｌ·Ｌ－１磷 酸 鹽－５ｍｍｏｌ·Ｌ－１脫 氧 膽 酸 鈉 緩 沖 液（ｐＨ８．０），３０００ｒ·ｍｉｎ－１渦旋５ｍｉｎ，４ ℃下離心半徑７．４ｃｍ，７０００ｒ·ｍｉｎ－１離心１０ｍｉｎ，傾出上清液至一新的離心管，即得。使用時保存在０～６℃冰水浴環(huán)境。
１．３．２ 胰脂肪酶抑制劑ＩＣ５０的測定
精密稱取*、新 利 司 他 各 １０ ｍｇ 至 于 １０ ｍＬ 量 瓶 中，ＤＭＳＯ 溶解并 定 容，冷 藏 儲 存，使 用 前 取 出 室 溫 融化，搖勻后以緩沖液稀釋得系列不同濃度的抑制劑溶液（*終濃度０～２８８０ｎｍｏｌ·Ｌ－１；新利司他終濃度０～６１４４ｎｍｏｌ·Ｌ－１）。分別?。埃常恚桃种苿┤芤汉蜕鲜鲆阎苽涞拿溉芤河谠嚬苤校泳彌_液補至２．７ｍＬ，搖勻，３７ ℃水浴溫孵１５ｍｉｎ，加入１ｍｍｏｌ·Ｌ－１ｐ－ＮＰＰ底物溶液０．３ｍＬ，３７℃水?。保埃恚椋詈罅⒓从冢矗埃担睿?測定其吸光度，空白以等量不含抑制劑的 溶 液 代 替，每 組 反 應(yīng) 平 行３次。ＩＣ５０計算采用公式（１），其中 Ｋ 為曲線的上限值，ａ為增長速度，采用三參數(shù)ｌｏｇｉｓｔｉｃ曲線擬合求解。
２ 結(jié)果
胰脂 肪 酶 作 用 于Ｐ－ＮＰＰ分解出 對 硝 基 苯 酚 （Ｐ－ＮＰ），該 產(chǎn) 物 在 ４０５ｎｍ 處有吸收峰，濃度 與 吸 光 值 成 正 比。測 定 奧 利司他、新利司他在不同濃度條件下與酶反應(yīng)后的吸光度，從 而 得 出 其 對 胰 脂 肪 酶 的 抑 制 活 性。*、新利司他對胰脂肪酶的抑制考察，隨著抑制劑濃度的增大，抑 制 率快速增大， 抑 制 率 均 近１００％。采用 公 式（１）計算得*的ＩＣ５０為１９．１ｎｍｏｌ·Ｌ－１，新利 司他的ＩＣ５０為７６ｎｍｏｌ·Ｌ－１。
３ 討論
*和新利司他作為強效的胃腸道脂肪酶抑制劑，是目前*的用于治療肥胖癥的藥 物。本研究測定得 奧 利 司 他 的ＩＣ５０為１９．１ｎｍｏｌ·Ｌ－１，新利司他的ＩＣ５０為７６ｎｍｏｌ·Ｌ－１，均為納摩爾級抑制。盡 管ＩＣ５０對 評 估 藥 物對酶的潛在抑制作用有較大的價值，但因其只能反應(yīng)藥物－靶標(biāo)結(jié)合的平衡狀態(tài)，不能反映整個結(jié)合的動力學(xué)過程，且無法預(yù)測藥物對酶抑制的快慢和作用持續(xù)的時間等，存在較大局限性使其無法與體內(nèi)的藥效活性建立關(guān)聯(lián)。
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