1 材料
1.1 儀器
2001HY-6003 型 CO2細胞培養(yǎng)箱、902 型－80 ℃冰箱（美國 Thermo Fisher Scientific 公司）；全波段多功能酶標儀、Universal HoodⅡ型成像分析儀（美國 Bio-Tek公司）；PHS-25型數(shù)顯臺式pH計（上海越平科學儀器有限公司）；CP124C 型電子天平[奧豪斯儀器（常州）有限公司]；Centrifuge 5810R型高速冷凍離心機（美國Eppendorf公司）；BD FACSCalibur型流式細胞儀（美國BD公司）；TS-8型轉移脫色搖床（海門市其林貝爾儀器制造有限公司）；Promo Vert型倒置顯微鏡[成貫儀器（上海）有限公司]；SW-CJ-2D 型超凈工作臺（蘇州凈化設備有限公司）；LDZX-50FBS型滅菌鍋（上海申安醫(yī)療器械廠）；DYY-6C型電泳儀（北京六一儀器廠）；ZHWY-103D型恒溫培養(yǎng)振蕩器（上海智城分析儀器制造有限公司）；K30型干式恒溫器（杭州奧盛儀器有限公司）；Step OnePlusTM型實時熒光定量聚合酶鏈式反應（PCR）儀（美國Applied Biosystems公司）；XH-B型旋渦混合器（江蘇康健醫(yī)療用品有限公司）。
1.2 藥品與試劑
原阿片堿由廖尚高教授課題組提供，高效液相色譜法（HPLC）和核磁共振檢測純度均在95％以上；磷酸鹽緩沖液（PBS粉末，無錫傲銳東源生物科技有限公司，自配，pH 7.2～7.4，質量濃度：11.74 μg/mL）；RPMI-1640培養(yǎng)基、0.25％*（美國Gibco公司，批號：8117293、1967534）；胎牛血清（美國ScienCell公司，批號：23954）。
2 方法
2.1 原阿片堿溶液的制備
用 DMSO 溶解原阿片堿，制成濃度為 100 mmol/L的母溶液（現(xiàn)配現(xiàn)用），0.22 μm的微孔濾膜濾過除菌。
2.2 細胞培養(yǎng)
HSC-LX2細胞使用含有10％胎牛血清及100 u/mL*和100 μg /mL*的1640高糖培養(yǎng)基于37 ℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每24 h換一次液，待細胞融合至80％～90％時傳代培養(yǎng)，取對數(shù)生長期細胞用于試驗。
2.3 MTT法檢測HSC-LX2細胞的增殖抑制率
取對數(shù)生長期的HSC-LX2細胞，以0.2 ％*消化，以離心半徑 4 cm（下同）、1 000 r/min 離心 5 min，收集細胞，用含10％胎牛血清1640培養(yǎng)液混懸細胞，以5×104mL－1的密度接種于96孔細胞培養(yǎng)板中，每孔100μL，邊緣用 200 μL 無菌的 PBS 填充以防干燥，置于37 ℃、5％ CO2細胞培養(yǎng)箱中放置貼壁。再將HSC-LX2細胞隨機分為對照組、DMSO組和不同濃度的原阿片堿組（25、50、100、200、400、500 μmol/L），每組 6 個復孔。輕輕吸棄原培養(yǎng)孔中的培養(yǎng)液，對照組加入含5％胎牛血清1640培養(yǎng)基100 μL，DMSO組加入含5‰DMSO的1640 培養(yǎng)基 100 μL，原阿片堿組分別加入 25、50、100、200、400、500 μmol/L原阿片堿的含5％胎牛血清1640培養(yǎng)基100 μL?！?/p>
3 結果
3.1 細胞增殖抑制率
與對照組比較，DMSO組細胞的OD值無明顯變化（P＞0.05），50、100、200、400、500 μmol/L 原阿片堿組細胞的OD值均明顯減小，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05或P＜0.01）。隨著原阿片堿濃度的增加，細胞的OD值逐漸減小。
3.2 細胞凋亡率
與對照組比較，中、高濃度原阿片堿組細胞凋亡率顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。
4 討論
肝纖維化是一種慢性、進行性、彌漫性的肝病理生理現(xiàn)象，屬可逆病變。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，盡管不同病因導致肝纖維化的機制不同，但均具有一個共同點，即都有HSCs的參與，HSCs是纖維化反應的重要效應器和細胞因子的主要來源和靶點 。
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