上海蟻霖科學(xué)儀器有限公司
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閱讀：311發(fā)布時(shí)間：2021-11-8
*(oxcarbazepine，OXC)是一種抗癲癇藥和抗驚厥藥，適用于治療原發(fā)性全面性強(qiáng)直-陣攣發(fā)作和部分性發(fā)作，伴或不伴繼發(fā)性全面發(fā)作，此外還可用于治療三叉神經(jīng)痛等。OXC 在服用后，迅速且?guī)缀?被肝臟中芳香酮還原酶降解為藥理活性 代謝產(chǎn)物 10-羥基卡馬 西平 (metabolite10-hydroxycarbamazepine，MHD)，OXC 的血清半衰 期 為 1.3~2.3 h ， MHD 的 血 清 半 衰 期 為(9.3±1.8)h。
1 儀器與試劑
ACQUITY I-S 超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀(美國 Waters 公司)；MS-105DU 型電子天平(梅特勒托利多儀器上海分部)；MulLifuge.XIR 高速冷凍離心機(jī)(德國 Thermo 公司)；其林貝爾QL-861 型渦旋儀(海門市其林貝爾儀器制造有限公司)。乙腈、甲醇(色譜純，德國默克公司)；甲酸(色譜純，ANAOUR CHEMICALS SUPPLY)；藥品：OXC( 中國食品藥品檢定研究院 ， 批 號(hào) ：100657-201102；含量：99.8%)；MHD(大連美侖生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：29331-92-R；含量：98%)；內(nèi)標(biāo)：卡博替尼(Ark Pharm 公司，批號(hào)：RSC181；含量：99.8%)。空白血清由溫州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科提供。
2 方法與結(jié)果
2.1 色譜條件與質(zhì)譜條件
色 譜 條 件 ： 色 譜 柱 為 Waters BEHC18(2.1 mm×150 mm，1.7 µm)，柱溫 40 ℃，流動(dòng)相為 0.1%甲酸(A)-乙腈(B)。梯度洗脫，0~1.0 min，60%A；1.0~1.5 min，60%→30%A；1.5~ 2.0 min，30%A；2.0~2.5 min，30%→60%A；2.5~ 3.0 min，60%A。流速為 0.3 mL·min?1，進(jìn)樣體積 1 µL。質(zhì)譜條件：電噴霧離子化正離子 MRM 檢測模式。OXC及MHD的檢測離子對分別為OXC[M-H+]m/z253.2→180.1，MHD[M-H+]m/z 255.3→194.2。
2.2 溶液的配制
精密稱取 OXC 10.00 mg 置于 10 mL 量瓶，用甲醇溶解配成 1 mg·mL?1 的 OXC 溶液，同理分別配制 1 mg·mL?1 的 MHD 溶液、卡博替尼溶液。將OXC、MHD 溶液混合配制成同時(shí)含有 20 µg·mL?1OXC 和 800 µg·mL?1 MHD 的對照品溶液，卡博替尼溶液稀釋成 200 ng·mL?1 作為內(nèi)標(biāo)。上述溶液均放置?80 ℃冰箱保存。對照品溶液分別稀釋成 6個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液，使得 OXC 濃度分別為0.2，1.0，2.0，5.0，10.0，20.0 µg·mL?1，MHD 濃度分別為 8，40，80，200，400，800 µg·mL?1。
2.3 血清樣本處理
取 血 清 樣 本 100 µL， 加 入 10 µL 內(nèi) 標(biāo)(200 ng·mL?1 的卡博替尼)，渦旋混勻 30 s，再加入300 µL 乙腈沉淀蛋白，渦旋混勻 30 s，離心(13 000 r·min?1)10 min，取上清液加至進(jìn)樣瓶中，1 µL 進(jìn)樣分析。
2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定與定量下限
取 7 個(gè) EP 管，1 個(gè)空白血清對照，其中 6 個(gè)分別加入 5 µL 6 個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液，分別加入 95 µL 空白血清，使得 OXC 的血藥濃度為0.01，0.05，0.10，0.25，0.50，1.00 µg·mL?1，MHD的血藥濃度為 0.4，2.0，4.0，10.0，20.0，40.0 µg·mL?1，渦旋 30 s，按照“2.3"項(xiàng)下方法操作后進(jìn)樣分析，分別以 OXC、MHD 與內(nèi)標(biāo)的峰面積比為縱坐標(biāo)(Y)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X)，進(jìn)行線性回歸得 OXC、MHD 的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程分別為Y=0.152 444X?0.497 848，r2=0.995 8；Y=0.013 467 9X+18.216，r2=0.996 2，表明 OXC、MHD血藥濃度分別在 0.01~1 µg·mL?1，0.4~40 µg·mL?1內(nèi)線性關(guān)系良好，定量下限分別為 0.01 ，0.4 µg·mL?1。2.5 專屬性試驗(yàn)分別將空白血清，添加 OXC、MHD 對照品溶液的空白血清，服用 OXC 的患者血清按照“2.3"項(xiàng)下血清樣本處理方法進(jìn)行操作，記錄色譜圖，結(jié)果見圖 1。結(jié)果顯示，OXC、MHD 在本實(shí)驗(yàn)色譜條件下保留時(shí)間分別約為 1.25，0.98 min，與內(nèi)標(biāo)卡博替尼*分離，測定結(jié)果不受血清內(nèi)源性物質(zhì)干擾，說明本方法專屬性強(qiáng)，適用于測定OXC、MHD 的血藥濃度。
3 討論
近年來，質(zhì)譜技術(shù)除了廣泛應(yīng)用于食品檢測、環(huán)境監(jiān)測、生命科學(xué)研究，在臨床檢測應(yīng)用領(lǐng)域中的作用也越來越重要，如維生素 D 和激素的檢測、新生兒遺傳代謝疾病篩查、藥動(dòng)學(xué)研究、治療藥物濃度監(jiān)測等。目前，臨床上應(yīng)用、泛的質(zhì)譜技術(shù)是 LC-MS/MS。該技術(shù)將高效分離和高靈敏度的檢測合二為一，分析的目標(biāo)化合物范圍廣(極性和非極性)，快速方便，大大減少假陽性幾率，有效降低經(jīng)濟(jì)成本。
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