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閱讀：280發(fā)布時間：2021-11-8
蘆薈是一種多年生百合科蘆薈屬肉質(zhì)的草本 植物，起源于南非，作為天然藥用植物，蘆薈 已有幾千年的藥用歷史，在我國古代醫(yī)書《神農(nóng)本 草經(jīng)》、《本草綱目》、《本草拾遺》中均記載著蘆薈 特殊的藥用功效，在《辭海》中也有相關(guān)記載： “蘆薈，主產(chǎn)于熱帶非洲，中國云南元江有野生”。 在日本，人們把蘆薈稱之為“不需要大夫”（醫(yī)者いらず），被譽(yù)為世界標(biāo)準(zhǔn)藥典的《英國藥典》對 其也有入藥記載 。
庫拉索蘆薈凝膠凍干粉（批號 ，云南萬綠生物股份有限公司）、*、透明質(zhì) 酸鈉（Bomei，相對分子質(zhì)量在 0.8 × 106 ~ 2.0 × 106 ）、透明質(zhì)酸酶（上海源葉生物科技有限公司， 300 ~ 500 U/mg）、*（NaC2H3O3•3H2O）、角質(zhì) 形成細(xì)胞培養(yǎng)液（第四軍醫(yī)大學(xué)組織工程中心）、 PBS（博士德）、MTT（Sigma）、 DMSO（Sigma）、 Human IL - 1α ELISA KIT（博士德）、Human IL - 8 ELISA KIT（Abcam）。冰醋酸、氯化鈉、十六烷基 基*（CTAB），均為國產(chǎn)分析純。
紫外 - 可見分光光度計(jì)（Thermo）、CO2 培養(yǎng) 箱（Thermo）、超凈工作臺（蘇凈安泰）、倒置顯微 鏡（Olympus）、微量振蕩器（其林貝爾）、酶標(biāo)儀 （BioTek）、恒溫箱（泰斯特）。
1.1.3 測試系統(tǒng)
細(xì)胞實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞為角質(zhì)形成細(xì)胞，由廣東 博溪生物科技有限公司通過細(xì)胞原代、傳代培養(yǎng)獲得。
透明質(zhì)酸酶能將大分子的透明質(zhì)酸水解成低 分子化合物，未水解的透明質(zhì)酸會與十六烷基 基*（CTAB）形成不溶物，而水解后的低分子 化合物不會。通過測定 405 nm 處的濁度值，可以 反映透明質(zhì)酸酶的活性。 實(shí)驗(yàn)設(shè)置：將庫拉索蘆薈凝膠粉按照 16.5、 33、82.5 和 165 mg/mL 的質(zhì)量濃度進(jìn)行分組，每 個實(shí)驗(yàn)分組按表 1 進(jìn)行操作。
實(shí)驗(yàn)方案：庫拉索蘆薈凝膠粉樣品檢測設(shè)置 8 個濃度梯度，每個濃度梯度下設(shè)置 3 個重復(fù)孔，同 時，實(shí)驗(yàn)設(shè)置溶劑對照孔、調(diào)零孔（角質(zhì)形成細(xì)胞 培養(yǎng)液）和陽性對照孔（PC， 40 mg/mL DMSO）。 通過 MTT 細(xì)胞活性檢測方法，篩選下一步實(shí)驗(yàn)中 細(xì)胞給藥的安全濃度。
數(shù)據(jù)經(jīng)過 SPSS 12.0 統(tǒng)計(jì)軟件做多組間單因 素方差分析，以 P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，由 于測試平臺特性，數(shù)據(jù)存在波動性，SD 值控制在 10% 以內(nèi)。通過測試，庫拉索蘆薈凝膠粉在 16.5 ~ 165 mg/mL 范圍內(nèi)對透明質(zhì)酸酶抑制率分別為 13.10% ~ 82.14%（P<0.05），低濃度下比對照品甘 草酸二鉀效果稍弱，但在 165 mg/mL 的高濃度下， 可以達(dá)到與 0.5 mg/mL *接近的效果，本 次測試的結(jié)果表明，庫拉索蘆薈凝膠粉測試樣具有 較好的透明質(zhì)酸酶活性抑制作用，且在一定濃度范 圍內(nèi)，抑制率與添加量呈正相關(guān)，與 0.5 mg/mL 甘 草酸二鉀的抑制趨勢和效果接近。根據(jù) MTT 實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出：與溶劑對照相 比，當(dāng)蘆薈凝膠粉濃度為 250 mg/L 時，細(xì)胞的相 對活力值為 91.40%，且無細(xì)胞毒性（注：選取細(xì)胞 相對活力值大于 90% 的轉(zhuǎn)折點(diǎn)濃度作為安全 給藥濃度）。根據(jù)形態(tài)學(xué)結(jié)果可以看出：樣品庫拉索蘆薈凝 膠粉質(zhì)量濃度為 250 mg/L 時，細(xì)胞邊緣輪廓清晰， 形態(tài)規(guī)則，胞內(nèi)無明顯顆粒物，與溶劑對照組細(xì)胞 狀態(tài)無明顯差異。故根據(jù) MTT 結(jié)果和形態(tài)學(xué)結(jié) 果，最終確定樣品庫拉索蘆薈凝膠粉在角質(zhì)形成細(xì) 胞上的安全給藥濃度為 250 mg/L。
蘆薈作為一種具有漫長種植史的草本植物，在 很多地方被當(dāng)?shù)厝擞糜诒窈托迯?fù)方面的藥材，而 對于蘆薈含有的成分修復(fù)作用的研究也很多， 但大多是基于蘆薈大黃素等蒽醌類物質(zhì)的功效研 究，對蘆薈凝膠的修復(fù)功效研究還較少。 透明質(zhì)酸酶是一類在動物組織和微生物中廣 泛存在的酶，它通過斷開透明質(zhì)酸（HA）糖鏈中的 N - 乙酰氨基葡糖和 D - 葡糖醛酸之間的糖苷鍵， 將其解聚和水解成小分子的 HA 或寡糖，HA 的代 謝對于皮膚的保濕、微觀炎癥和損傷的修復(fù)都有著 重要的作用，透明質(zhì)酸酶調(diào)節(jié) HA 代謝的作用在生 理活動中也越來越受到重視，活性成分對透明 質(zhì)酸酶的抑制，與其保濕、曬后修復(fù)等功效都有著 重要的關(guān)聯(lián)。 紫外線損傷，又稱光老化，是由于皮膚在紫外線，特別是 UVB 的照射下，局部出現(xiàn)的紅斑、角質(zhì) 層破壞等微觀損傷，也是皮膚眾多微觀炎癥和損傷 中較為常見的微觀損傷。
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