上海蟻霖科學(xué)儀器有限公司
會(huì)員1.png)
上海蟻霖科學(xué)儀器有限公司
暫無(wú)信息 |
閱讀：399發(fā)布時(shí)間：2021-11-8
支氣管哮喘（以下簡(jiǎn)稱哮喘）是由炎性細(xì)胞（嗜酸 性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞）、氣道結(jié)構(gòu)細(xì)胞、氣道平滑 肌細(xì)胞和細(xì)胞組分共同參與的慢性氣道炎癥性疾病。GINA 2016 版定義哮喘為一種以慢性氣道炎癥和 氣道高反應(yīng)性為特征的異質(zhì)性疾病。目前，作為哮 喘控制治療的線藥物，吸入糖皮質(zhì)激素（ICS）雖然可以顯著改善兒童哮喘的癥狀，但并不能改變疾 病的自然進(jìn)程，且不能預(yù)防哮喘的復(fù)發(fā) ，如何減輕 氣道炎癥、改善氣道重塑，從而防治哮喘，是臨床 上亟需解決的問(wèn)題。
3 周齡 SD 雄性大鼠，清潔 級(jí)，體質(zhì)量（95±5）g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中 心提供，許可證號(hào)：SCXK（粵）2013-0034。采用簡(jiǎn) 單隨機(jī)分配法，分成 4 組：空白對(duì)照組、模型對(duì)照 組、*散組及*組，每組 10 只。本實(shí) 驗(yàn)對(duì)動(dòng)物的處理符合動(dòng)物倫理學(xué)要求。
*散按 《太平惠民合劑局 方》所記載的原方比例：蓮子肉 10 g、薏苡仁 10 g、 砂仁 10 g、桔梗 10 g、白扁豆 15 g、茯苓 15 g、人 參 10 g、甘草 10 g、白術(shù) 15 g、山藥 15 g。復(fù)方各 成分藥由廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院提供，用單 蒸水洗滌后，在三角瓶中加 4 倍體積的三蒸水浸泡 2 h，煎 2 次，每次煎 30 min，去渣，兩煎液混合， G4 濾器過(guò)濾，于 60 ℃水浴中濃縮成每毫升含原藥材 1 g，密封隔水煮沸備用。 *混懸液：天平稱取 10 mg *干 粉，加入無(wú)水乙醇少許，并充分溶解，最后加入生 理鹽水至 50 mL，避光保存于 3~4 ℃冰箱。* 干 粉 購(gòu) 自 廣 州 賽 國(guó) 生 物 有 限 公 司 ， 國(guó) 藥 準(zhǔn) 字 ： H。 1%卵白蛋白（ovalbumin，OVA）生理鹽水溶液：天 平稱取適量的 OVA 干粉，用生理鹽水溶液充分溶解，使 1 mL 液體中含 OVA 10 mg，每次用前臨時(shí)配 制。OVA 購(gòu)自北京綠生源科技有限公司，批號(hào)： A5253。0.1％OVA+Al（0H）3 混合液：天平稱取適量 的 OVA 干粉，用少許生理鹽水溶解均勻，然后用濾 菌器（0.22 μm）濾入到將 NaOH、AlCl3 按 3∶l 的摩爾 比混合的 Al（OH）3 溶液中，并加生理鹽水進(jìn)行稀 釋，使每 1.5 mL 的混合液中包含 1 mg OVA 和 100 mg Al（OH）3凝膠，每次用前臨時(shí)配制。 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）試劑盒：包括大鼠白 細(xì)胞介素-10（IL-10）、大鼠白細(xì)胞介素-17（IL-17）、 大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（TGF-β1）試劑盒，購(gòu)自美國(guó) R&D Systems 公司，批號(hào)為 EK-M20157。
BSA223S-CW 萬(wàn)分之一電子天平，上海菁海儀器有限公司；LX 300 型低速迷你離心機(jī)，海門(mén)市其林貝爾儀器制造有限公司； JW-3021HR 高速臺(tái) 式冷凍離心機(jī)，安徽嘉文儀器裝備有限公司；ST360 酶標(biāo)儀，上?？迫A儀器有限公司；Neg-50 恒溫 冰凍切片機(jī)，Thermo scientific 公司；55I 生物顯微 鏡，日本 Nikon 公司；Image-Pro Plus7 彩色圖像分 析系統(tǒng)，美國(guó) Media Cybernetics 公司。
通過(guò)致敏和霧化激發(fā)，成功復(fù)制大 鼠哮喘模型，造模方法 如下：
1、致敏：哮喘各組 大鼠分別在第 1 天和第 8 天腹腔注射 0.1％OVA（100 mg）+Al（OH）3（100 mg）混合液 1 mL 致敏，空白對(duì)照 組以生理鹽水代替致敏液；
2、霧化激發(fā)：哮喘各組 大鼠第 15 天起以 1% OVA 霧化激發(fā)，空白對(duì)照組以 生理鹽水代替致敏液，隔天 1 次，每次 30 min，連 續(xù) 4 周。大鼠復(fù)制成功模型可出現(xiàn)呼吸急促，口唇 發(fā)紺，腹肌抽搐，站立不穩(wěn)的現(xiàn)象。霧化第 1 天開(kāi)始 同時(shí)給藥，*散組以每次 15 g·kg-1 、25 mL·kg-1 的給藥量經(jīng)口灌服；*組以每次 5 g·kg- 1 、 25 mL·kg-1 的藥量經(jīng)口灌服；模型組及空白對(duì)照組均 灌服生理鹽水 25 mL·kg- 1 。以上各組給藥均為 1 次·d-1 ，連續(xù) 4 周，療程結(jié)束 24 h 后處死大鼠取材， 其中模型組有 2 只在療程結(jié)束前已死亡。
包括毛發(fā)、呼吸、活 動(dòng)量、食量、體質(zhì)量、不良反應(yīng)等。
（bronchial alveolar lavage fluid，BALF）細(xì)胞計(jì)數(shù) BALF 制備：處死大鼠，取 仰臥位，打開(kāi)胸腔，用留置針行，結(jié)扎右 側(cè)主支氣管，0.3 mL 生理鹽水灌洗 3 次，BALF 4 ℃、4 000 r·min-1 離心 10 min，取上清液，-20 ℃ 保存?zhèn)溆茫籅ALF 中細(xì)胞沉淀用 PBS 重懸，并涂片作 瑞氏姬姆薩染色，于 400 倍鏡下隨機(jī)選取 3 個(gè)視野，分別進(jìn)行白細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒 細(xì)胞計(jì)數(shù)，計(jì)算每高倍鏡視野下各類細(xì)胞數(shù)目平均 值并記錄。
見(jiàn)表 1。各組大鼠 在給藥前體質(zhì)量無(wú)明顯差異，給藥后*散 組、*組大鼠生理狀態(tài)、哮喘癥狀均好轉(zhuǎn)， 體質(zhì)量與模型對(duì)照組相比明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué) 意義（P＜0.05）。
見(jiàn)表 2。模型組 BALF 中，炎癥細(xì)胞計(jì)數(shù)較 空白對(duì)照組顯著增多，*散組和*組 較模型對(duì)照組顯著降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）。
哮喘是一種涉及多種炎癥細(xì)胞相互作用、許多介 質(zhì)和細(xì)胞因子參與的一種慢性氣道炎癥疾病。氣道 慢性炎癥被認(rèn)為是哮喘的基本病理改變和反復(fù)發(fā)作的主要病理生理基礎(chǔ)。過(guò)往證據(jù)表明 Th1/Th2 細(xì)胞 比例和功能失衡是哮喘主要的免疫學(xué)異常，然而， 更多的研究提示，單純的 Th1/Th2 平衡理論并不能進(jìn) 行完整解釋 。近年來(lái)，Th17 分泌的促炎作用的前炎 癥細(xì)胞因子 IL-17，以及 CD4+ CD25+ Treg 分泌的抑炎 作用的 IL-10、TGF-β，是哮喘機(jī)制的研究熱點(diǎn)之 一 。
儀表網(wǎng) 設(shè)計(jì)制作，未經(jīng)允許翻錄必究 .? ? ?
請(qǐng)輸入賬號(hào)
請(qǐng)輸入密碼
請(qǐng)輸驗(yàn)證碼