糖脂代謝紊亂在糖尿病的發(fā)生、發(fā)展過程中具有 重要作用，因而尋找有效糾正糖脂代謝紊亂的藥 物，對(duì)防治 2 型糖尿病有積極作用。過氧化物酶體 增殖體激活受體（PPARs）是核受體超家族配體依賴激 活核轉(zhuǎn)錄因子。目前已發(fā)現(xiàn)有 α、γ 和 δ 三種亞 型，PPARs 被證實(shí)在很多病理生理過程中發(fā)揮調(diào)控 作用，如糖、脂及*代謝，PPARs 是治療人類 代謝疾病的關(guān)鍵靶點(diǎn)。目前臨床應(yīng)用的胰島素增敏 劑專屬和*激動(dòng) PPARγ 受體，在發(fā)揮治療 2 型糖 尿病療效的同時(shí)，可產(chǎn)生增加體質(zhì)量、心衰等嚴(yán)重 不良反應(yīng)；而 PPARα、γ 雙和/或 PPARα、γ、δ 三 靶點(diǎn)部分激動(dòng)劑可以克服這一局限，因而尋找 PPAR 雙和/或三靶點(diǎn)部分激動(dòng)劑成為該領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。
1 材料與方法
1.1 動(dòng)物 8~10 周雌性 KK/Upj-AY 小鼠 50 只，體 質(zhì)量（32±3）g，SPF 級(jí)，以高脂飼料喂養(yǎng)，故體質(zhì)量 變化會(huì)比正常組小鼠明顯；8~10 周雌性 C57BL/6J 小 鼠 10 只，體質(zhì)量（26±2）g。
1.2 藥物及試劑 和厚樸酚，自行制備，含量大于 95%；鹽酸*。 TC ELISA Kit，上海滬尚生物技術(shù)有限公司； 甲醛；中性樹；甲醇；乙醇。
1.3 儀器ACCU-CHEK Advantage 血糖檢測(cè)系統(tǒng)， 上海羅氏診斷產(chǎn)品有限公司；Elx800 型酶標(biāo)儀，美 國 BioTek 公司；ES-1100 型電子天平，湖南湘平儀器廠；THZ-312 型孵箱，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公 司；BCD-258A/C 型冰箱，中國海爾公司；TS-8 型 轉(zhuǎn)移脫色搖床，海門市其林貝爾儀器制造有限公司。
1.4 分組、模型復(fù)制及給藥方法 50 只 KK/Upj-AY 小鼠以專用高脂飼料飼養(yǎng) 4 周后，禁食 12 h，檢測(cè) 空腹血糖（FBG），以 FBG≥13.9 mmol·L-1 為糖尿病小 鼠標(biāo)準(zhǔn)，成模率 100%。KK/Upj-AY 小鼠造模成功 后隨機(jī)分為 5 組，即模型組、*組（10 mg·kg-1 ）、 和厚樸酚低（25 mg·kg- 1 ）、中（50 mg·kg- 1 ）、高（100 mg·kg-1 ）劑量組，另取 10 只 C57BL/6J 小鼠作為正常 對(duì)照組，模型組和正常對(duì)照組給予同等體積的蒸餾 水，每天給藥 1 次，持續(xù) 35 d
1.5 指標(biāo)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)期間，每日觀察大鼠毛色光澤 度，大、小便，精神狀態(tài)及活動(dòng)度等；每周測(cè)定血 糖值和體質(zhì)量，給藥 35 d 后測(cè)定糖耐量、胰島素含 量及血脂各項(xiàng)指標(biāo)。
1.5.1 血糖值測(cè)定給藥期間每周測(cè)定血糖值 1 次， 上午給藥前禁食 3 h 后，采用尾靜脈取血，用 ACCU-CHEK Advantage 血糖檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)量血糖值， 并記錄數(shù)值。
1.5.2 糖耐量測(cè)定 末次給藥后第 2 天，禁食 3 h， 開始糖耐量實(shí)驗(yàn)的時(shí)間即為 0 h。測(cè)定 0 h 血糖值， 灌服劑量為 2.5 g·kg-1 的葡萄糖溶液，隨后測(cè)定 1 h、 2 h 血糖值，并計(jì)算曲線下面積 AUC。
1.5.3 胰島素含量及血脂各項(xiàng)指標(biāo)測(cè)定給藥 35 d 后，禁食不禁水 12 h，眼眶取血，37 ℃水浴靜置 1 h， 3 500 r·min- 1 離心 10 min；取上層血清，采用 Rat/ Mouse Insulin 96 Well Plate Assay 試劑盒，按照其說 明書操作步驟進(jìn)行，測(cè)量出小鼠血清中胰島素及TC、HDL、LDL、TG 的含量。1.5.4 體質(zhì)量測(cè)定 KK/Upj-AY 小鼠以專用高脂飼料 飼養(yǎng) 4 周后，以 FBG≥13.9 mmol·L- 1 為模型復(fù)制成 功，即為 0 周，并開始給藥。給藥期間用 ES-1100 型電子天平每周測(cè)量體質(zhì)量 1 次，并記錄數(shù)值。
1.6 HE 染色觀察各組小鼠胰腺組織 2 型糖尿病 KK/Upj-AY 小鼠飼養(yǎng) 4 周后，按“1.4”給藥方法給 藥 35 d。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，剖取胰腺組織，經(jīng) 10%福爾 馬林溶液固定，常規(guī)取材，脫水，石蠟包埋，制片 （4 μm 厚），HE 染色，光學(xué)顯微鏡觀察胰腺的病 變。主要觀察內(nèi)分泌部胰島的狀況：
（1）在 100 倍低 倍鏡下（目鏡 10 倍、物鏡 10 倍）測(cè)量每視野胰島 數(shù)；
（2）用“顯微鏡用側(cè)微尺”在 100 倍鏡下測(cè)量每 個(gè)胰島的面積。計(jì)算出每個(gè)標(biāo)本平均胰島數(shù)、每個(gè) 胰島的平均面積。
1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法 采用SPSS 16.0 軟件對(duì)結(jié)果進(jìn) 行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差（x± s）表示，兩組 間比較采用 t 檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析 及方差分析中均數(shù)的兩兩比較，變量的相互關(guān)系采 用多元相關(guān)分析。P＜0.05 或 P＜0.01 表示差異有統(tǒng) 計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果與正常組比較，模型組小鼠的血糖 值每周均顯著升高（P＜0.01）。與模型組比較，從第 1 周開始，和厚樸酚中劑量組、和厚樸酚高劑量組及 *組小鼠的血糖值均顯著降低（P＜0.05，P＜ 0.01）。與正常組比較，模型組小鼠的 AUC 值明顯升高（P＜0.01）。與模型組比較，和厚樸酚中 劑量組、和厚樸酚高劑量組及*組小鼠的 1、2 h 的 AUC 值均顯著降低（P＜0.05，P＜0.01）。與正常組比較，模型組小 鼠的胰島素表達(dá)水平顯著升高（P＜0.01）。與模型組 比較，和厚樸酚中劑量組、和厚樸酚高劑量組及吡 格列酮組小鼠的胰島素表達(dá)水平顯著降低（均 P＜ 0.01）。見表 4。與正常組比較，模型組小鼠 血清中 TC、TG、LDL 及 HDL 含量均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意 義。
3 討論高糖、高飽和脂肪攝入，以及缺乏運(yùn)動(dòng)的現(xiàn)代生 活方式，已經(jīng)促使糖尿病成為第三大非傳染性疾 病。其中 2 型糖尿病占絕大多數(shù)，其胰島素分泌量 并不低，稱為非胰島素依賴性糖尿病，占糖尿病患 者總數(shù)的 90%以上。與 1 型糖尿病不同，2 型糖尿 病的關(guān)鍵病理環(huán)節(jié)并非胰島素缺乏，而是胰島素抵抗，改善胰島素抵抗是治療 2 型糖尿病的理想手 段。以噻唑烷二酮類為代表的 γ 過氧化物酶體增殖 體激活受體專屬和*激動(dòng)劑，可顯著增強(qiáng)靶組織 對(duì)胰島素的敏感性，作為胰島素增敏劑在臨床上用 于治療 2 型糖尿病，在非常小的劑量下，即具有顯 著減輕胰島素抵抗、改善糖代謝的臨床療效，為 2 型糖尿病治療提供了嶄新思路。但由于噻唑烷二酮 類為 PPARγ 專屬和*激動(dòng)劑，其活化和轉(zhuǎn)錄表達(dá) 不僅提高胰島素敏感性，而且同時(shí)促進(jìn)脂肪細(xì)胞分 化，調(diào)控參與炎性反應(yīng)、高血壓以及動(dòng)脈硬化的相 關(guān)基因。因而作為 PPARγ 專屬和*激動(dòng)劑在取 得顯著臨床療效的同時(shí)，發(fā)現(xiàn)其有增加體質(zhì)量，導(dǎo) 致骨質(zhì)疏松、水鈉潴留和心衰等嚴(yán)重不良反應(yīng)。研 究表明，由于 PPARα/PPARγ 雙重部分激動(dòng)劑或總 PPAR 部 分 激 動(dòng) 劑（同 時(shí) 對(duì) PPAR 的 三 個(gè) 亞 型 PPARα、PPARα/δ 和 PPARγ 有部分激動(dòng)效應(yīng)）誘導(dǎo) 核受體采取不同構(gòu)象，導(dǎo)致核受體轉(zhuǎn)錄與 PPARγ 專 屬和*激動(dòng)劑不同的協(xié)同激動(dòng)因子的擴(kuò)充，可以實(shí)現(xiàn)與 PPARγ *激動(dòng)劑產(chǎn)生 “效應(yīng)”不同 的靶基因轉(zhuǎn)錄性調(diào)節(jié)效應(yīng)——次效應(yīng)，從而 在對(duì) 2 型糖尿病保持良好治療作用的同時(shí)，避免相應(yīng)的不良反應(yīng)。
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