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技術(shù)文章

紫外分光光度法常見問題（儀器的校正和檢定、對溶劑的要求、測定法）

閱讀：2234發(fā)布時間：2008-10-28

1.儀器的校正和檢定

　　由于溫度變化對機(jī)械部分的影響，儀器的波長經(jīng)常會略有變動，因此除應(yīng)定期對所用的儀器進(jìn)行全面校正檢定外，還應(yīng)于測定前校正測定波長。

常用汞燈中的較強(qiáng)譜線237.83、 253.65、 275.28、296.73、313.16、334.15、365.02、404.66、435.83、546.07與576.96nm；

或用儀器中氘燈的486.02與656.10nm譜線進(jìn)行校正；

鈥玻璃在279.4、287.5、333.7、360.9、418.5、460.0、484.5、536.2與637.5nm波長處有尖銳吸收峰,也可作波長校正用,但因來源不同會有微小的差別，使用時應(yīng)注意。
 
吸收度的準(zhǔn)確度可用重鉻酸鉀的硫酸溶液檢定。取在120℃干燥至恒重的基準(zhǔn)重鉻酸鉀約60mg，精密稱定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀釋至1000ml，按下表規(guī)定的波長處測定并計算其吸收系數(shù)。 規(guī)定的吸收系數(shù)如下表，相對偏差可在±1％以內(nèi)。

　　─────────┬─────┬─────┬─────┬──────
　　波　　長　　(nm)　│ 235(zui小)│ 257(zui大)│ 313(zui小)│　350(zui大)
　　─────────┼─────┼─────┼─────┼──────
　　吸收系數(shù)E1％　1cm │　124.5 　│　144.0 　│　　48.62 │　106.6
　　─────────┴─────┴─────┴─────┴──────
雜散光的檢查可按下表的試劑和濃度，配制成水溶液,置1cm石英吸收池中，在下表規(guī)定的波長處測定透光率，應(yīng)符合表中的規(guī)定。

　　───────┬───────┬────────┬───────
　　　　試　　劑　│ 濃度％ (g/ml)│ 測定用波長(nm) │　透光率 (％)
　　───────┼───────┼────────┼───────
　　碘　　化　　鈉│　　1.00　　　│　　　220 　　　│　　<0.8
　　　亞 硝 酸 鈉 │　　5.00　　　│　　　380 　　　│　　<0.8
　　───────┴───────┴────────┴───────── 
 2.對溶劑的要求


　　測定供試品前，應(yīng)先檢查所用的溶劑在供試品所用的波長附近是否符合要求；即用1cm石英吸收池盛溶劑,以空氣為空白（即空白光路中不置任何物質(zhì)）測定其吸收度,溶劑和吸收池的吸收度,在220～240nm范圍內(nèi)不得超過0.40；在241～250nm范圍內(nèi)不得超過0.20；在251～300nm范圍內(nèi)不得超過0.10， 在300nm以上時不得超過0.05。
3.測定法

　　測定時，除另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對照，采用1cm的石英吸收池，在規(guī)定的吸收峰波長±2nm以內(nèi)測試幾個點(diǎn)的吸收度，以核對供試品的吸收峰波長位置是否正確，除另有規(guī)定外，吸收峰波長應(yīng)在該品種項(xiàng)下規(guī)定的波長±2nm以內(nèi)；否則應(yīng)考慮該試樣的真?zhèn)?、純度以及儀器波長的準(zhǔn)確度,并以吸收度zui大的波長作為測定波長。一般供試品溶液的吸收度讀數(shù)，以在0.3～0.7之間的誤差較小。儀器的狹縫波帶寬度應(yīng)小于供試品吸收帶的半寬度，否則測得的吸收度會偏低；狹縫寬度的選擇，應(yīng)以減小狹縫寬度時供試品的吸收度不再增加為準(zhǔn)，由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測定供試品的吸收度后應(yīng)減去空白讀數(shù)，再計算含量。

　　用作鑒別和檢查項(xiàng)目的方法，分別按各品種項(xiàng)下的方法進(jìn)行。鑒別項(xiàng)下吸收度讀數(shù)的范圍可根據(jù)配制供試液時的準(zhǔn)確度及制劑的實(shí)際含量確定。

用于含量測定的方法一般有以下幾種。

用于含量測定的方法一般有以下幾種。

　　(1) 對照品比較法

　　按各品種項(xiàng)下的方法，分別配制供試品溶液和對照品溶液，對照品溶液中所含被測成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測成分標(biāo)示量的100±10％,所用溶劑也應(yīng)*一致，在規(guī)定的波長測定供試品溶液和對照品溶液的吸收度后，按下式計算供試品中被測溶液的濃度：
　　C<[x]>＝(A<[x]>／A<[r]>)C<[r]>
　　式中
　　C<[x]>為供試品溶液的濃度；
　　A<[x]>為供試品溶液的吸收度；
　　C<[r]>為對照品溶液的濃度；
　　A<[r]>為對照品溶液的吸收度。
    (2) 吸收系數(shù)法

　　按各品種項(xiàng)下的方法配制供試品溶液，在規(guī)定的波長處測定其吸收度，再以該品種在規(guī)定條件下的吸收系數(shù)計算含量。用本法測定時，應(yīng)注意儀器的校正和檢定。
    (3) 計算分光光度法
      采用計算分光光度法應(yīng)慎重。本法有多種，使用時均應(yīng)按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法進(jìn)行。當(dāng)吸收度處在吸收曲線的陡然上升或下降的部位測定時，影響精度的因素較多，故對照品和供試品測試條件應(yīng)盡可能一致。若測定時不用對照品，如*測定法，則應(yīng)在測定時對儀器作仔細(xì)的校正和檢定。


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