Ettan2-D DIGE熒光差異蛋白表達(dá)分析技術(shù)在傳統(tǒng)雙向電泳技術(shù)的基礎(chǔ)上，結(jié)合了多重?zé)晒夥治龅姆椒?，在同一塊膠上共同分離多個分別由不同熒光標(biāo)記的樣品，并次引入了內(nèi)標(biāo)的概念，極大地提高了結(jié)果的準(zhǔn)確性，可靠性和重復(fù)性。在DIGE技術(shù)中，每個蛋白點(diǎn)都有它自己的內(nèi)標(biāo)，并且軟件全自動根據(jù)每個蛋白點(diǎn)的內(nèi)標(biāo)對其表達(dá)量進(jìn)行校準(zhǔn)，保證所檢測到的蛋白豐度變化是真實的。DIGE技術(shù)可檢測到樣品間小于10%的蛋白表達(dá)差異，統(tǒng)計學(xué)可信度達(dá)到95%以上。利用Ettan DIGE技術(shù)還可以對微量(5μg)樣本進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析，例如激光捕獲顯微切割 (LCM)得到的樣品或者很難獲得的珍貴樣品等。 Ettan DIGE系統(tǒng)包括CyDye DIGE 熒光染料，IPGphor 3/Ettan DALT 雙向電泳設(shè)備；Typhoon多功能激光掃描儀和DeCyder 2D 或ImageMaster DIGE差異分析軟件。CyDye DIGE 熒光染料專門為DIGE 系統(tǒng)設(shè)計，這些熒光標(biāo)記物是分子量和電荷匹配的，具有信號強(qiáng)，光譜分開，吸收和發(fā)射峰窄等特點(diǎn)。利用IPGphor 3 進(jìn)行向分離和Ettan DALT 垂直電泳儀進(jìn)行第二向分離，在一塊2-D 膠上同時分離多達(dá)3 個樣品。Typhoon 的光學(xué)系統(tǒng)經(jīng)過優(yōu)化，在 CyDye熒光標(biāo)記蛋白成像中能達(dá)到高靈敏度，并且其控制軟件經(jīng)過優(yōu)化設(shè)計采集Ettan DIGE圖像。特別開發(fā)的軟件 DeCyder 2D*自動化進(jìn)行DIGE 結(jié)果的多重樣品間的差異比較，并通過內(nèi)標(biāo)對每個蛋白點(diǎn)和每個差異進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。該軟件全自動定位和分析在一塊膠中的多重樣品，并進(jìn)行多塊膠之間的比較分析，得到精確的蛋白豐度差異變化的計算結(jié)果。ImageMaster DIGE *采用了Decyder 2D 差異分析軟件中的的共找點(diǎn)功能，使得定量比較結(jié)果可信賴。
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