關(guān)鍵詞：?jiǎn)慰寺】贵w、Monte Carlo法模擬分析、宿主細(xì)胞蛋白、MabSelect SuRe™、 Capto™ adhere
摘要
我們開發(fā)出并使用了一種非常高效的單克隆抗體純化方案，在兩步法層析工藝中將起始樣品的聚體水平從12%降至0.6%，而單體產(chǎn)量達(dá)到81%。此工藝包括采用MabSelect SuRe進(jìn)行捕獲步驟，以及采用Capto adhere進(jìn)行精細(xì)純化步驟。此外，我們還介紹了從基于HiScreen預(yù)裝柱（5 mL）的小規(guī)模工藝放大到在ÄKTApilot™系統(tǒng)上使用AxiChrom柱（500至600 mL）的大規(guī)模工藝的線性放大。放大方案是利用實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（Design of Experiments，DoE)方法與Monte Carlo法模擬分析的結(jié)合來開發(fā)的。DoE研究的結(jié)果作為模擬研究的輸入值，以便驗(yàn)證放大工藝的可靠性。宿主細(xì)胞蛋白（HCP）的量從37000降低至1.3 ppm，配體殘留也從1.8 ppm降低至可忽略不計(jì)。通過確定高產(chǎn)量的穩(wěn)定參數(shù)，過濾步驟也得到了優(yōu)化。
簡(jiǎn)介
將小規(guī)模研究的優(yōu)化結(jié)果線性放大至中試和大規(guī)模工藝的能力是任何成功的工藝開發(fā)項(xiàng)目的關(guān)鍵。內(nèi)在的挑戰(zhàn)在于存在的風(fēng)險(xiǎn)，即優(yōu)化的參數(shù)和結(jié)果——如提高的產(chǎn)量和純度——可能無法以可預(yù)測(cè)的方式從小規(guī)模線性放大至中試或大規(guī)模生產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)。為了克服這些障礙，并確保工藝開發(fā)流程有一個(gè)更加容易預(yù)測(cè)且穩(wěn)定的結(jié)果，我們?yōu)樯镏扑幍纳a(chǎn)開發(fā)了一個(gè)工藝開發(fā)流程，著重于維持優(yōu)化參數(shù)（如產(chǎn)量和純度）從小規(guī)模到中試研究的完整性。
這是一套四個(gè)應(yīng)用文獻(xiàn)中的第三個(gè)，這一套應(yīng)用文獻(xiàn)旨在為您提供高效的工具和方法以增強(qiáng)有效單克隆抗體的鑒定和生產(chǎn)——從實(shí)驗(yàn)室和臨床試驗(yàn)的探索階段到大規(guī)模生產(chǎn)。其它的應(yīng)用文獻(xiàn)是：
• 單克隆抗體純化工藝中蛋白A捕獲步驟的高通量篩選和優(yōu)化（28-9468-58）
• 單克隆抗體純化工藝中復(fù)合配基介質(zhì)精細(xì)純化步驟的高通量篩選和優(yōu)化（28-9509-60）
• 一種靈活的基于ReadyToProcess™產(chǎn)品的抗體純化工藝（28-9403-48）
這里所說的單克隆抗體純化工藝中的主要挑戰(zhàn)是指起始樣品中蛋白聚集的發(fā)生率高（12%）。在維持基于MabSelect SuRe和Capto adhere介質(zhì)的兩步法層析工藝對(duì)純度和產(chǎn)量的預(yù)設(shè)標(biāo)準(zhǔn)的同時(shí)，這種抗體工藝成功放大了超過10倍。利用包含DoE和計(jì)算機(jī)的蒙特卡羅法模擬分析的流程對(duì)這種從小規(guī)模研究中計(jì)算出的工藝條件進(jìn)行進(jìn)一步的改善和穩(wěn)定性驗(yàn)證。利用HiScreen柱在小規(guī)模階段開展的DoE研究產(chǎn)生了捕獲和精細(xì)純化步驟的點(diǎn)（sweet spot）分析，其中有關(guān)產(chǎn)量和純度的預(yù)設(shè)條件得以滿足。來自DoE研究的結(jié)果隨后作為蒙特卡羅法模擬分析的輸入值，以檢測(cè)兩步法層析所獲得的條件的穩(wěn)定性。此流程（圖1）允許在放大之前對(duì)層析條件和工藝穩(wěn)定性進(jìn)行快速篩選。
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