一、HPLC的日常操作條件
溫度：10～30℃；相對(duì)濕度<80％；是恒溫、恒濕，遠(yuǎn)離高電磁干擾、高振動(dòng)設(shè)備，有良好的通風(fēng)設(shè)施。
二、HPLC的環(huán)境設(shè)置：
HPLC用水可以通過以下幾個(gè)方面來(lái)得到：
1專門的純水機(jī)或超純水機(jī)；
2去離子水重蒸；
3二次或三次重蒸水；
4采用類似家用的純水機(jī)；
5市場(chǎng)上瓶裝的純凈水或蒸餾水；
6其它途徑；
不管采用何種途徑，配制流動(dòng)相應(yīng)用新鮮水，水質(zhì)越高放置時(shí)間越短。理想的HPLC用水應(yīng)為18.2Ω的超純水，并通過0.22um的濾膜，除去熱源、有機(jī)物、無(wú)機(jī)離子及空氣等。
三、HPLC六通閥進(jìn)樣器的使用及保養(yǎng)
六通閥進(jìn)樣器是高效液相色譜系統(tǒng)中的進(jìn)樣器，它是由圓形密封墊(轉(zhuǎn)子)和固定底座(定子)組成。美國(guó)Rheodyne公司的六通閥進(jìn)樣器通用，各大HPLC儀器制造商均以此產(chǎn)品作為儀器的進(jìn)樣器。
四、工作原理
手柄位進(jìn)樣(Load)位置時(shí)，樣品經(jīng)微量進(jìn)樣針從進(jìn)樣孔注射進(jìn)定量環(huán)，定量環(huán)充滿后，多余樣品從放空孔排出；將手柄轉(zhuǎn)動(dòng)至進(jìn)樣(Inject)位置時(shí)，閥與液相流路接通，由泵輸送的流動(dòng)相沖洗定量環(huán)，推動(dòng)樣品進(jìn)入液相分析柱進(jìn)行分析。
雖然六通閥進(jìn)樣器具有結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、使用方便、壽命長(zhǎng)、日常無(wú)需維修等特點(diǎn)，但正確的使用和維護(hù)將能增加使用壽命，保護(hù)周邊設(shè)備，同時(shí)增加分析準(zhǔn)確度。如使用得當(dāng)?shù)脑挘?/span>通閥進(jìn)樣器一般可連續(xù)進(jìn)樣3萬(wàn)次而無(wú)需維修。
手柄處于Load和Inject之間時(shí)，由于暫時(shí)堵住了流路，流路中壓力驟增，再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位，過高的壓力在柱頭上引起損壞，所以應(yīng)盡快轉(zhuǎn)動(dòng)閥，不能停留在中途。在HPLC系統(tǒng)中使用的注射器針頭有別于氣相色譜，是平頭注射器。一方面，針頭外側(cè)緊貼進(jìn)樣器密封管內(nèi)側(cè)，密封性能好，不漏液，不引入空氣；另一方面，也防止了針頭刺壞密封組件及定子。六通閥進(jìn)樣器的進(jìn)樣方式有部分裝液法和*裝液法兩種。使用部分裝液法進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量最多為定量環(huán)體積的75％，如20μl的定量環(huán)最多進(jìn)樣15μl的樣品，并且要求每次進(jìn)樣體積準(zhǔn)確、相同；使用*裝液法進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量最少為定量環(huán)體積的3至5倍，即20μl的定量環(huán)最少進(jìn)樣60至100μl的樣品，這樣才能*置換樣品定量環(huán)內(nèi)殘留的溶液，達(dá)到所要求的精密度及重現(xiàn)性。推薦采用100ul的平頭進(jìn)樣針配合20ul滿環(huán)進(jìn)樣?？筛鶕?jù)進(jìn)樣體積的需要自已制作定量環(huán)，一般不要求精確計(jì)算定量環(huán)的體積，譬如，一根名義上10μl的定量環(huán)，實(shí)際是9μl還是1lμl并不重要，因?yàn)楸粶y(cè)樣品和校正樣品的進(jìn)樣體積保持一致，在計(jì)算結(jié)果時(shí)誤差都被抵消了。
進(jìn)樣樣品要求無(wú)微粒和能阻死針頭及進(jìn)樣閥的物質(zhì)，樣品溶液均要用0．45μm的濾膜過濾。防止微粒阻塞進(jìn)樣閥和減少對(duì)進(jìn)樣閥的磨損。為防止緩沖鹽和其它殘留物質(zhì)留在進(jìn)樣系統(tǒng)中，每次結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣器，通常用不含鹽的稀釋劑、水或不含鹽的流動(dòng)相沖洗，在進(jìn)樣閥的Load和Inject位置反復(fù)沖洗，再用無(wú)纖維紙擦凈注射器針頭的外側(cè)。
五、泵的保養(yǎng)
使用流動(dòng)相盡量要清潔；
進(jìn)液處的砂芯過濾頭要經(jīng)常清洗；
流動(dòng)相交換時(shí)要防止沉淀；
避免泵內(nèi)堵塞或有氣泡；
每次分析結(jié)束后，要反復(fù)沖洗進(jìn)樣口，防止樣品的交叉污染；
六、柱的保養(yǎng)
柱子在任何情況下不能碰撞、彎曲或強(qiáng)烈震動(dòng)；
當(dāng)柱子和色譜儀聯(lián)結(jié)時(shí)，閥件或管路一定要清洗干凈；
要注意流動(dòng)相的脫氣；
避免使用高粘度的溶劑作為流動(dòng)相；
進(jìn)樣樣品要提純；
嚴(yán)格控制進(jìn)樣量；
每天分析工作結(jié)束后，要清洗進(jìn)樣閥中殘留的樣品；
每天分析測(cè)定結(jié)束后，都要用適當(dāng)?shù)娜軇﹣?lái)清洗柱；
若分析柱長(zhǎng)期不使用，應(yīng)用適當(dāng)有機(jī)溶劑保存并封閉；
七、紫外燈的保養(yǎng)
在分析前、柱平衡得差不多時(shí)，打開檢測(cè)器；在分析完成后，馬上關(guān)閉檢測(cè)器。
樣品池要保養(yǎng)
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