紫外可見分光光度計在生物學領(lǐng)域的應用
紫外可見分光光度計在生物學的應用分析中, 常見的有蛋白質(zhì)含量檢測;一般是在蛋白質(zhì)的吸收峰上作吸光度測定。因為蛋白質(zhì)對紫外光的主要吸收波長為280nm, 所以, 采用光度測量模式, 將儀器的波長GOTO 到蛋白質(zhì)的zui大吸收峰波長280nm 上, 測試其吸光度大小, 就可完成對蛋白質(zhì)的定量檢測。
目前, 紫外可見分光光度計的應用主要是在定量分析方面。先從生命科學領(lǐng)域的應用來介紹。紫外可見分光光度計在生命科學中應用非常廣泛。zui主要的是以下5 個方面。
1. 蛋白質(zhì)分析工作中的應用
紫外可見分光光度計在蛋白質(zhì)的分析中, zui主要的是作蛋白質(zhì)含量檢測;一般是在蛋白質(zhì)的吸收峰上作吸光度測定。因為蛋白質(zhì)對紫外光的主要吸收波長為280nm, 所以, 采用光度測量模式, 將儀器的波長GOTO 到蛋白質(zhì)的zui大吸收峰波長280nm 上, 測試其吸光度大小, 就可完成對蛋白質(zhì)的定量檢測。
2. 核酸分析工作中的應用
紫外可見分光光度計在核酸分析中的應用, 主要是用來對核酸的定量檢測; 因為核酸的吸收峰在260nm。我們只要采用光度測量模式, 將紫外可見分光光度計的波長GOTO 到核酸的zui大吸收峰260nm 上, 測試其吸光度大小就是了。
3. 氨基酸分析工作中的應用
紫外可見分光光度計在氨基酸分析中的應用, 主要是用來對氨基酸的定量檢測。因為氨基酸對紫外光的主要吸收波長為230nm, 所以, 我們只要采用光度測量模式, 將紫外可見分光光度計儀器的波長GOTO 到氨基酸的zui大吸收峰230nm 上, 就可測試其吸光度大小, 從而計算出氨基酸的含量。但是, 因為氨基酸分析時, 一般是將它溶解在水中, 而水在230 nm 附近有很多干擾吸收線, 所以, 在用紫外可見分光光度計對氨基酸分析檢測時, 要注意防止干擾的問題。此外, 還需注意: 只有少數(shù)氨基酸有紫外吸收, 多數(shù)氨基酸無紫外吸收或很弱, 測定時要衍生化后再測。
4. 糖類分析測試工作中的應用
紫外可見分光光度計在糖的分析中, 主要是作定量檢測。因為糖對紫外光的主要吸收波長為218nm, 所以, 對糖類進行分析時, 只要采用光度測量模式, 將紫外可見分光光度計儀器的波長GOTO 到氨基酸的zui大吸收峰218 nm上, 就可測試其吸光度大小, 從而計算出糖的含量。
5. 多糖分析測試工作中的應用
紫外可見分光光度計在多糖的分析中, 主要也是作定量檢測。因為多糖對紫外光的主要吸收波長為206nm, 所以, 我們只要采用光度測量模式, 將紫外可見分光光度計儀器的波長GOTO 到多糖的zui大吸收峰206 nm 上, 就可測試其吸光度大小, 從而計算出多糖的含量。
但是多糖的分析難度很大。因為, 在206 nm 處的時候, 光源(氘燈) 的能量已經(jīng)很弱, 儀器光學系統(tǒng)的能量輸出也很低, 光電倍增管的靈敏度也很低, 206nm 左右的干擾也很大。所以, 用紫外可見分光光度計作多糖的分析是很難的事, 目前許多科學家正在研究中。
