紫外分光光度計的原理：
物質(zhì)的吸收光譜本質(zhì)上就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量，相應(yīng)地發(fā)生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結(jié)果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子 、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會相同，因此，每種物質(zhì)就有其的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸 收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。
紫外分光光度法的定量分析基礎(chǔ)是朗伯-比爾(Lambert-Beer)定律。即物質(zhì)在一定濃度的吸光度與它的吸收介質(zhì)的厚度呈正比，其數(shù)學(xué)表示式如下：
A=錬c
式中：A—吸光度(又稱光密度、消光值)，
å—摩爾吸光系數(shù)(其物理意義為：當(dāng)吸光物質(zhì)濃度為1摩爾/升，吸收池厚為1厘米，以一定波長原光通過時，所 引起的吸光值A(chǔ))，b—吸收介質(zhì)的厚度(厘米)，c—吸光物質(zhì)的 濃度(摩爾/升)。
物質(zhì)的顏色和它的電子結(jié)構(gòu)有密切的關(guān)系，當(dāng)輻射(光子)引起電子躍遷使分子(或離子)從基 態(tài)上升到激發(fā)態(tài)時，分子(或離子)就會在可見區(qū)或紫外呈現(xiàn)吸光，顏色的發(fā)生或變化是和分 子的正常電子結(jié)構(gòu)的變形的。當(dāng)分子中含有一個或更多的生色基因(即具有不飽和鍵的 原子基團(tuán))，輻射就會引起分子中電子能量的改變。常見的生色團(tuán)有：
CO， -N=N-， -N=O，-C N，CS
如果兩個生色團(tuán)之間隔一個碳原子，則形成共軛基團(tuán)，會使吸收帶移向較長的波長處(即紅 移)，且吸收帶的強(qiáng)度顯著增加。當(dāng)分子中含有助色基團(tuán)(有未共用電子對的基團(tuán))時，也會 產(chǎn)生紅移效應(yīng)。常見的助色基團(tuán)有：-OH -NH2， -SH， -Cl, -Br, -I
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