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光度測量基礎介紹

閱讀:2發(fā)布時間:2026-9-18

光度測量基礎介紹

光度測量方法已有超過一個世紀的歷史,其根源可追溯至19世紀的基礎測量發(fā)展。如今,光度計在生物學、化學、工程和藥學領域,廣泛應用于環(huán)境分析、醫(yī)學診斷和工業(yè)質量控制,與pH測量并列為最重要的分析方法之一。

WTW在光度測量領域深耕超過30年,通過自動測量設置和分析質量保證(AQA)簡化復雜的測量程序,使用戶能夠方便快速地完成測量。移動式光度測量在環(huán)境和飲用水監(jiān)測中越來越重要。

光與顏色

Phos(希臘語)意為"光",metrein(希臘語)意為"測量"。

圖1:光譜大致可分為三個范圍:紫外線(UV)<380納米)、可見光約380至780納米和紅外線(IR)>780納米。
圖1:光譜大致可分為三個范圍:紫外線(UV)<380納米)、可見光約380至780納米和紅外線(IR)>780納米。

光度法通過光源分析溶液或溶解樣品,通過測量光吸收來確定物質濃度。其原理是光由電磁波組成,不同物質對光的吸收程度各不相同。

比色法與光度法的區(qū)別

比色法(Colorimetry)歷史比光度法更久遠,側重于使用視覺顏色比較或數字測量來測定溶液中的顏色,通常僅工作在可見光譜范圍內。

光度法(Photometry)通過測量光強度來量化光通過樣品時的"吸收或透射",可以使用全光譜波長,包括紫外和紅外。

測量原理

光度計測量三種基本類型,彼此遞進:

  1. 透射率 T(%):直接測量,由比色皿后(I)和前(I?)的光強比值得出。透射率隨層厚和物質濃度呈指數變化,也用于180°濁度測量(FAU單位)和濁度校正。

    圖2:(I)和(Io)后(Io)角層后光強比。
    圖2:(I)和(Io)后(Io)角層后光強比。
  2. 吸光度 E:吸收度或消光度,也稱為光學密度,是樣品對光的衰減/“消光"程度的衡量指標。它是根據傳輸的對數計算得出的:E = 對數10(T)。樣品中的吸收度與層厚和濃度成正比變化。

  3. 濃度:通過消滅或傳播獲得。 基于校準曲線對特定波長的物質(mg/l,ppm,…)進行定量分析。

    表3:透射/吸收與濃度的關系。
    表3:透射/吸收與濃度的關系。
透射率 T (%)吸光度 E濃度關系
99%0無吸收
10%1中等吸收
1%2高吸收

濃度測定的基礎

濃度測量的前提條件:

  1. 染料以溶解形式存在

  2. 顏色可通過特定波長λ的吸光度測量檢測

  3. 化學反應導致染料的生成或還原(如COD測定)

  4. 顏色反應具有固定的反應時間

  5. 顏色強度與濃度相關

  6. 反應必須對所求物質具有選擇性,且不得與其他離子發(fā)生交叉反應。

  7. 顏色必須在一定時間內保持穩(wěn)定,例如反應結束后10分鐘內顏色不變(參見分析說明)。

Lambert-Beer定律

Lambert-Beer定律描述了吸光度與濃度之間的線性關系:
公式:E = ε × c × d

其中:

  • E = 吸光度

  • ε = 摩爾吸光系數(物質常數)

  • c = 物質濃度

  • d = 光程(比色皿厚度)

該定律僅在低濃度且為單色光時嚴格成立。在高濃度或混合物質情況下會產生偏差。

光度測量的校準

  1. 校準曲線
    通過測量已知濃度的標準溶液來建立吸光度與濃度之間的關系。線性范圍內的校準遵循Lambert-Beer定律。

  2. 零點校準
    測量前必須用空白溶液(去離子水或試劑空白)進行零點校準,以消除儀器漂移和背景干擾。

光度計類型

  1. 濾光片光度計(如pHotoFlex系列)
    使用干涉濾光片選擇特定波長,結構簡單可靠,適用于現場和例行測量。

  2. 分光光度計(如photoLab® 7000系列)
    使用光柵或棱鏡進行連續(xù)波長選擇,適用于實驗室復雜分析。帶參比光束的設備非常穩(wěn)定,漂移小,較少需要調零。

特性濾光片光度計分光光度計
波長選擇固定濾光片連續(xù)可調
應用場景現場/例行測量實驗室/復雜分析
穩(wěn)定性良好優(yōu)秀(參比光束)
光譜掃描不支持支持

調零的重要性

  1. 濾光片光度計
    每次測量前必須調零,因為不使用參比光束,元器件漂移直接影響測量結果。

  2. 分光光度計
    參比光束設計使其非常穩(wěn)定,漂移小,無需頻繁調零。但進行復雜測量(如光譜掃描)時,通常需要基線校準。

示例:在銨測試中,10mE的漂移(未調零)意味著0.04mg/l的誤差——在低測量范圍內代表10%的可避免假讀數。

移動式光度測量實踐

數字化和移動式光度測量的兩個關鍵因素:

  1. 正確的設備/傳感器操作

  2. 正確的試劑使用

WTW(Xylem Analytics Germany品牌)提供通用數字便攜式分光光度計、堅固的濾光片光度計,以及具有濁度、pH和ORP多參數功能的便攜式光度計。



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