通常，高壓蒸汽滅菌溫度是一個固定值，如，試管斜面培養(yǎng)基和搖瓶液體培養(yǎng)基的滅菌要求為：121℃，20min，但在121℃只是滅菌溫度的下限，實際的滅菌溫度在121℃～124℃（或123℃）之間波動。
如果是自動控溫型滅菌鍋，設定好滅菌溫度下限為121℃后，當溫度升到124℃（或123℃）時，自動斷電停止加熱，當溫度降到121℃時，自動開始加熱；如果是手動控溫型滅菌鍋，當溫度升到124℃時，手動切斷電源停止加熱，當溫度降到121℃時，手動接通電源開始加熱。
1）非自動控溫型滅菌鍋多為小型滅菌鍋
對于這類滅菌鍋必 須排凈冷空氣，如果不排凈冷空氣，冷空氣熱膨脹后對壓力鍋的工作壓力有所貢獻，此時壓力和溫度不能一一對應，顯示的溫度比鍋內(nèi)的實際工作溫度高，滅菌鍋的工作溫度不能達到設定的殺菌溫度，會影響滅菌效果。
2）自動控溫型滅菌鍋
自動控溫型滅菌鍋通過熱敏電極監(jiān)測鍋內(nèi)溫度變化，顯示屏上顯示的溫度是鍋內(nèi)真實的工作溫度，在冷空氣沒有排凈的情況下，也能夠保證滅菌的溫度要求。由于飽和水蒸汽的滅菌，所以在使用自動控溫型滅菌鍋時，也應該排放冷空氣，提高滅菌效果，鍋下通常設有排水排氣閥，滅菌時可將排水閥向左（向右為排水）旋轉少許，讓少量蒸汽排出，也有的滅菌設備上設有可調(diào)排氣閥，滅菌時，始終保持排氣閥處于微開狀態(tài)，可起到排出冷空氣的作用。
1）非自動控溫型滅菌鍋：
①手動打開安全閥，看安全閥是否正常；
②加熱升溫過程中，看壓力表指針的上升狀況是否有受阻情況發(fā)生，沒有受阻，可正常使用。
2）自動控溫型滅菌鍋的簡易安全檢查：
①手動打開安全閥，看安全閥是否正常；
②加水時，觀察水位指示燈是否正常顯示水位狀況；
③在排除冷空氣的前提下， 觀察顯示屏上的溫度和壓力表指示溫度的差，通常情況下，壓力表上的溫度略高于顯示屏上的溫度，此壓力差如果不超過3℃，可正常使用。
（1）水：水溫過高可能會導致預定的真空水平改變，水溫應盡量低。滅菌鍋使用的水應符合應用水質(zhì)量，并且溫度不超過15℃。水的硬度值在0.7～2.0mmoL /L之間。超出該范圍的硬度值可能會引起水垢和腐蝕等問題。從而縮短滅菌鍋的使用壽命，使用的水需經(jīng)過過濾和處理，應保持鍋體清潔。
（2）蒸汽的干燥程度滅菌鍋應使用干燥程度不小于0.9的飽和蒸汽，即蒸汽含水量不超過10%，金屬負載狀態(tài)下，干燥程度不小于0.95，以保持溫度與壓力符合線性關系。
（3）滅菌時間滅菌時間是指滅菌過程中滅菌室內(nèi)達到規(guī)定溫度后滅菌所需時間。
操作中，應注意觀察蒸汽的進汽速度和壓力, 一般保持壓力和溫度同步上升。
實際工作中常需要對液體滅菌，高壓滅菌鍋說明書中，表明能夠?qū)ζ繝畹囊后w進行滅菌處理，但在實驗中卻遇到了意外的情況：用敞口的玻璃瓶滅菌，其結果是玻璃瓶中的液體減少了1/3；用塑料薄膜緊緊封住瓶口，封口塑料薄膜中間破裂，玻璃瓶中的液體仍減少1/3。在對液態(tài)物質(zhì)進行滅菌時，當滅菌結束注意卸壓不能過快，盡量將排氣閥關小，保持自然降壓，保持系統(tǒng)原有的平衡，以防產(chǎn)生液體減少或噴濺現(xiàn)象。
為保證高壓滅菌鍋安全有效的工作，應加強滅菌鍋的日常維護與保養(yǎng)，定期檢測各類控制閥門，保證其正常的工作狀態(tài)。
