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血清脂蛋白的快速離心分離法

閱讀：29發(fā)布時(shí)間：2025-9-29

血清脂蛋白的快速離心分離法
YU.2003.7
利用不同容量的角式轉(zhuǎn)頭及很容易配制的梯度液，在各種型號(hào)的超速離心機(jī)上都能得到滿意的分離結(jié)果。下面舉了幾個(gè)分離實(shí)例，實(shí)際上還可以應(yīng)用于各種型號(hào)各種容量的固定角式轉(zhuǎn)頭。
（一） 梯度液
A液：11.40gNacl，0.1g EDTA-Na2，置于1000ml量筒中加入500ml重蒸水及1
ml 1N NaOH，混勻至全部溶解。加重蒸水至1000ml最后再加3ml重蒸水（Nacl：0.195mol）。終密度1.006g/cm3，PH10.37。
B液：加24.98g NaBr 到100ml A液中。終密度1.182g/cm3。（Nacl：0.195mol， NaBr：7.65mol），PH9.72。
C液：加78.32g NaBr 到100ml A液中。終密度1.478g/cm3。（Nacl：0.195mol， NaBr：7.65mol），PH8.86。
（二） 離心機(jī)及轉(zhuǎn)頭
• 離心機(jī)：Hitachi CP-MX系列超速離心機(jī)或其他類似機(jī)組。
Hitachi CS-150GXL微量超速離心機(jī)。
• 轉(zhuǎn)頭，離心管；S 140 AT：140,000rpm,1,050,000×g，10×2ml，K=5，1PC厚壁管。
S 80 AT3：80,000rpm,415,000×g，8×8ml，K=23，6PC厚壁管。
S 70 AT：70,000rpm,505,000×g，8×40ml，K=44，40PA管。
（三） 血漿-血球分離：
全血，角轉(zhuǎn)頭或甩平轉(zhuǎn)頭3000rpm×20min，沉淀為血細(xì)胞，上清血漿待用。
（四） 乳糜粒分離：
• 離心參數(shù)：各種轉(zhuǎn)頭均可用，4×106（g×min），10℃
• 梯度液：離心管下部3/4容積為血漿，上部1/4容積為0.15MNacl+0.3MEDTA。PH7.4。
• 離心結(jié)果：乳糜粒上浮，離心管傾斜，吸管貼管壁慢吸出（約占血漿容積的2~6%。禁令12小時(shí)以上供血者血漿中乳糜含量很低，食后供血者含量較高。
（五） 血清脂蛋白分離：
（?。￢LDL分離（ρ<1.006g/cm3）

轉(zhuǎn)頭
離心管內(nèi)液體分布
離心參數(shù)
結(jié)果
S140AT
(CS-150GXL機(jī)組)
下部600μl血漿
上部300μl A液
140，000rpm×50min
16℃
加速：5
減速：7
可見明顯分層上部約1/3VLDL吸出
S80AT3
(CS-150GXL機(jī)組)
下部3.4ml血漿
上部1.7mlA液
80，000rpm×4.5hrs
16℃
加速：5
減速：7
同上
P70AT
(CP-MX機(jī)組)
下部24ml血漿
上部11.7ml A液
70，000rpm×8hrs
16℃
加速：5
減速：7
同上

（ⅱ）LDL（含IDL）分離（1.006g/cm3<ρ<1.063g/cm3）

轉(zhuǎn)頭
離心管內(nèi)液體分布
離心參數(shù)
結(jié)果
S140AT
(CS-150GXL機(jī)組)
次離心后上部VLDL取出，下部600μl移入另一離心管，加入300μl B液，充分混合
140，000rpm×80min
16℃
加速：9 減速：7
上部1/3體積LDL+IDL吸出
S80AT3
(CS-150GXL)
次離心后上部VLDL吸出，，下部3.4ml移入另一離心管，加入1.7ml B液并充分混合
80，000rpm×5.5hrs
16℃
加速：9減速：7
同上
P70AT
(CP-MX系列超速機(jī)或類似機(jī)型)
次離心后上部11.7ml吸出，下部約24ml 移入另一離心管，加入11.7ml B液，充分混合
70，000rpm×10hrs
16℃
加速：9 減速：6
同上

（ⅲ）HDL分離（1.063g/cm3<ρ<1.21g/cm3）

轉(zhuǎn)頭
離心管內(nèi)液體分布
離心參數(shù)
結(jié)果
S140AT
(CS-150GXL機(jī)組)
第二次離心后吸出上部300μl后，下部600μl移入另一離心管，加入300μl C液，充分混合
140，000rpm×140min
16℃
加速：9
減速：7
可見較明顯分層，
上部為HDL，下部為血清白蛋白及球蛋白
S80AT3
(CS-150GXL機(jī)組)
第二次離心后吸出上部約1.7ml、下部3.4ml移入另一離心管，加入1.7ml C液，充分混合
80，000rpm×8小時(shí)
16℃
加速：9
減速：7
同上
P70AT
(CP-MX系列機(jī)或其他類型機(jī)組)
第二次離心后吸出上部1/3、下部2/3移入另一離心管，加入約12ml C液，充分混合
70，000rpm×15小時(shí)
16℃
加速：9
減速：6
同上

（本文部分實(shí)驗(yàn)由上海長(zhǎng)海醫(yī)院 賈鳳玉完成）
參考文獻(xiàn)
（1） 余興明：“血清脂蛋白的離心分離技術(shù)"，“生命的化學(xué)"，1997.3
（2） Hitachi KoKi：“himac Application’,No:89,1999.7 No：103，2000.10

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