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液相色譜儀的定量分析方法主要有以下幾種:
歸一化法:當(dāng)樣品中所有組分能全部流出色譜柱,并在檢測(cè)器上都能產(chǎn)生相應(yīng)信號(hào)(得到色譜峰)時(shí),常采用歸一化法。優(yōu)點(diǎn):簡(jiǎn)單方便,不受進(jìn)樣量及操作條件波動(dòng)的影響。缺點(diǎn):所有組分都必須出峰,每個(gè)組分都必須有校正因子。
外標(biāo)法(又稱標(biāo)準(zhǔn)曲線法):配制已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行色譜分析,測(cè)量各組分的峰面積或峰高,作峰面積(或峰高)和濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線,然后在與標(biāo)準(zhǔn)樣品分析相同操作條件下,進(jìn)入相同量(一般為體積)的未知樣品,測(cè)得被分析組分的峰面積(或峰高),在標(biāo)準(zhǔn)曲線上即可查得相應(yīng)的濃度。優(yōu)點(diǎn):簡(jiǎn)便、無(wú)需所有組分都出峰(校正因子),經(jīng)常用于幾個(gè)組分的分析。缺點(diǎn):操作條件波動(dòng)的影響較大,進(jìn)樣量影響大。
內(nèi)標(biāo)法:當(dāng)色譜柱不能使所有的組分都流出來(lái),或者各組分都能流出,但檢測(cè)器不能對(duì)所有組分都給出相應(yīng)的色譜峰,或者有的樣品含量過(guò)大(得不到完整的峰),或者過(guò)小,或者只要求定量分析復(fù)雜樣品中幾個(gè)組分時(shí),可采用內(nèi)標(biāo)法。過(guò)程:在總量為m樣品中如入質(zhì)量為mS的內(nèi)標(biāo)物S,然后根據(jù)被測(cè)物和內(nèi)標(biāo)物的重量和在色譜圖上相應(yīng)的峰面積比求出某組分i的含量。優(yōu)點(diǎn):不需所有組分都出峰(校正因子),操作條件和進(jìn)樣量基本無(wú)影響。缺點(diǎn):內(nèi)標(biāo)物難找——穩(wěn)定無(wú)反應(yīng)、結(jié)構(gòu)性能相似、保留時(shí)間內(nèi)插并分離。注意:內(nèi)標(biāo)法比較適用于低含量組分的分析,一般選作內(nèi)標(biāo)物的物質(zhì),在樣品中不存在,其保留值在所有組分保留值的中間,加入內(nèi)標(biāo)物的含量和待測(cè)組分含量不應(yīng)相差很大。
疊加法(內(nèi)加法):當(dāng)圖譜上沒(méi)有適當(dāng)位置可插入內(nèi)標(biāo)峰,或因各種條件限制無(wú)合適的內(nèi)標(biāo)物時(shí),此時(shí)可先以樣品出一張圖,再在樣品中加入一定量被測(cè)組分后再進(jìn)樣,看峰面積增加了多少,由此比例來(lái)求出原始含量。
以上是液相色譜儀的定量分析方法介紹,供您參考。
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