當(dāng)前位置:廣州格維恩環(huán)??萍加邢薰?/a>>>技術(shù)文章>>兩蟲檢測系統(tǒng)概述
兩蟲檢測系統(tǒng)概述1.采樣淘洗濃縮系統(tǒng)采用符合中國國標(biāo)及美國EPA要求的囊式過濾器對水樣進(jìn)行 過濾,將孢囊、卵囊及其他物質(zhì)收集在過濾器上,該過濾器可用于實(shí)驗(yàn)室及野外現(xiàn)場水樣過濾。濾囊利用兩蟲淘洗緩沖液將攔截在濾囊上的 兩蟲振蕩洗脫下來,后進(jìn)行離心收集。2. 免疫磁分離系統(tǒng)(IMS)IMS過程使用美國UniBest優(yōu)佰達(dá)公司的ClearScan系列兩蟲免疫磁分離試劑盒, 利用帶有特異性抗體的磁珠與樣品中的賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲特異性抗原相結(jié)合,在磁場中高效選擇性分離,該步驟可保證檢測的特異性。

3.IFA(間接免疫熒光)染色系統(tǒng)3.使用美國UniBest優(yōu)佰達(dá)公司的Cellabs型檢測賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲診斷試劑 盒(內(nèi)含*的免疫球蛋白M五聚體FITC單克隆抗體)對水樣中的兩蟲(抗原)進(jìn)行熒光標(biāo)記,同時(shí)利用細(xì)胞核染色劑DAPI(4,6-二脒基-2-苯基 吲哚)與細(xì)胞核中的雙鏈DNA結(jié)合發(fā)出熒光,排除假陽性反應(yīng),從而提高鏡檢準(zhǔn)確性。顯微鏡檢系統(tǒng)使用兩蟲高級熒光顯微鏡對著色樣本進(jìn)行檢測,觀察樣本,對符合孢囊和卵囊大小 、外形、熒光特性的被觀察物依據(jù)國標(biāo)GB/T 5750.12-2006中賈第鞭毛蟲孢囊與隱孢子蟲卵囊的特征(見尾頁)進(jìn)行定性、定量分析。
兩蟲檢測方法主要有:熒光免疫分析法(1623 法)、酶聯(lián)免疫法、PCR法。雖然PCR法及酶聯(lián)免疫法的敏感性都比1623法好,但PCR法以及酶聯(lián)免疫法所需的試劑比較昂貴、成本高、檢測周期較長,且操作較為復(fù)雜,對實(shí)驗(yàn)人員的技術(shù)要求較強(qiáng)。目前,對水中隱孢子蟲和賈第鞭毛蟲的檢測方法是美國BPA制定的1623法。“EPA1623方法"是由美國國家制定的用于測定水中隱孢子蟲和賈第鞭毛蟲的標(biāo)準(zhǔn)方法。概括地說,該方法分為三部。對水樣進(jìn)行過濾,收集水中的卵囊和孢囊;第二,利用免疫磁分離來純化過濾樣品;第三,對純化的樣品通過免疫熒光顯微鏡法來檢測“兩蟲的數(shù)量。
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