液相色譜壓力異常

影響因素影響系統(tǒng)壓力的因素主要有流動(dòng)相的溶劑組成、溫度及流速這三方面：

1.流動(dòng)相的粘度是產(chǎn)生反壓的主要原因，下圖為有機(jī)溶劑－水的粘度隨組成與壓力的關(guān)系圖：

由上圖可以看到，乙腈－水比例為     （20:80）、甲醇－水比例為（40:60至50:50）時(shí)，系統(tǒng)的壓力。因此，在做實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)盡量避開(kāi)這個(gè)比例范圍。另外，異丙醇粘度大，一般不作流動(dòng)相使用。

 2.流速對(duì)反壓的影響是線性關(guān)系，流速增加，反壓亦增大。

 3.溫度對(duì)反壓的影響是反比關(guān)系，溫度升高，反壓降低，對(duì)某些流動(dòng)相的影響更大一些。

 4.液相色譜儀各模塊之間的連接管路也會(huì)產(chǎn)生壓力，系統(tǒng)壓力與管路的長(zhǎng)度成正比，與管路直徑的四次方成反比（1/4D）。上述考慮的是柱外因素對(duì)系統(tǒng)壓力的影響，色譜柱對(duì)系統(tǒng)壓力的影響也很大，反壓與色譜柱長(zhǎng)度成正比，與填料顆粒度的平方成反比（2.5μｍ填料比3.5μｍ填料反壓高）。

壓力原因

具體到壓力問(wèn)題的表現(xiàn)形式上，主要有壓力高、壓力低或沒(méi)有壓力以及壓力不穩(wěn)。

造成壓力高問(wèn)題的主要原因有：溫度太低；流速太高；流動(dòng)相粘度大；管路堵塞；儀器或色譜柱堵塞；壓力傳感器問(wèn)題。系統(tǒng)壓力高的故障排除流程圖如下：

產(chǎn)生壓力低情況的可能原因：系統(tǒng)內(nèi)有滲漏處；單向閥堵塞；入口管路有氣泡；溶劑濾頭堵塞；所用溶劑不正確，儲(chǔ)液瓶中無(wú)溶劑；溫度太高，流速太低；泵未輸送流動(dòng)相；泵關(guān)閉或保險(xiǎn)絲斷了。

壓力波動(dòng)

1.脫氣機(jī)排氣不充分；

2.流動(dòng)相未正確脫氣；

3.所用溶劑不混溶或易揮發(fā)；

4.壓力傳感器及泵問(wèn)題。

其中，大多數(shù)的壓力波動(dòng)都是由于氣泡引起的

基線噪音大

1.流動(dòng)相中有氣體–溶劑脫氣；

2.流動(dòng)池中有氣泡–在出口處使用0.009"的管路；

3.色譜柱上的污染物被洗脫–平衡系統(tǒng)，直至基線穩(wěn)定；如樣品中有保留非常強(qiáng)的組分，可設(shè)置強(qiáng)洗脫程序；

4.滲漏–此時(shí)應(yīng)修復(fù)滲漏，重新連接或更換接頭；

5.檢測(cè)器燈能量低–更換燈；

6.靈敏度太高–使用合適的采樣頻率，調(diào)節(jié)增益（如ELSD檢測(cè)器）；

7.檢測(cè)器流動(dòng)池臟–清潔流動(dòng)池；

8.電噪音–除去電噪音的來(lái)源：屏蔽電纜，清潔觸點(diǎn)；

9.采樣頻率設(shè)置過(guò)大–一味追求高采樣頻率，可能對(duì)靈敏度沒(méi)有任何幫助，同時(shí)也會(huì)產(chǎn)生比較大的噪音：UV檢測(cè)器推薦降低采樣頻率，HPLC推薦1-5Hz，UPLC推薦20Hz。

同步的基線噪音

1.大多數(shù)情況下都是泵引起的，泵頭中存在空氣–將溶劑脫氣，并重新灌注泵；

2.單向閥問(wèn)題–超聲清洗單向閥或更換；

3.柱塞桿斷裂–更換；

4.混合問(wèn)題–更換一個(gè)體積更大的Mixer，以增加系統(tǒng)體積；

5.電噪音–改變電路，除去來(lái)源。

不同步的基線噪音

1.氣泡—流動(dòng)相要脫氣；

2.檢測(cè)器中有氣泡／空氣—流動(dòng)相脫氣，或在檢測(cè)器的后面加反壓（不適用于RI檢測(cè)器）；

3.滲漏—特別是肉眼無(wú)法發(fā)現(xiàn)的微漏或者泵的內(nèi)漏，會(huì)造成流速的變化和混合比例的變化，從而導(dǎo)致基線噪音，此時(shí)應(yīng)修復(fù)滲漏，重新連接或更換接頭；

4.管路堵塞—除去堵塞，沖洗系統(tǒng)；

5.電噪音—除去來(lái)源，改變電路。

Cyclic基線

1.溫度影響–隔離熱源，或搬離臨近的通風(fēng)口，或增加流動(dòng)池溫度；

2.混合問(wèn)題–更換一個(gè)體積更大的Mixer，以增加系統(tǒng)體積；

3.流動(dòng)相中的氣體–溶劑脫氣；

4.泵不穩(wěn)定–檢查維修泵；

5.管路堵塞–沖洗系統(tǒng)，排除并除去堵塞源頭；

6.電問(wèn)題–改變電路，或除去根源。

基線漂移：上漂或者下漂

1.梯度變化引起，如溶劑Ｂ的吸收值高于溶劑Ａ–使用基線差減，或嘗試新的流動(dòng)相；

2.化合物從色譜柱上洗脫–平衡系統(tǒng)，直至基線穩(wěn)定；如樣品中有保留非常強(qiáng)的組分，可設(shè)置強(qiáng)洗脫程序；

3.溶劑改變（氣體吸附，蒸發(fā)）–氦氣脫氣，隔離溶劑；

4.溶劑滲漏–擰緊或者更換接頭；

5.檢測(cè)器溫度影響（尤其是示差，電化學(xué)以及電導(dǎo)檢測(cè)器）–流動(dòng)池溫度調(diào)節(jié)；

6.柱溫波動(dòng)–等待柱溫平穩(wěn)，使用柱預(yù)加熱器；

7.壓力變化–過(guò)濾溶劑以及樣品，或樣品太粘稠；

8.混合問(wèn)題–更換一個(gè)體積更大的Mixer，以增加系統(tǒng)體積。