河豚魚毒素ELISA試劑盒
貨號：Ounuo97001

河豚魚毒素ELISA試劑盒，本品采用競爭性酶 測技術(shù)用于鲀魚類肌肉、皮膚等樣本中河豚魚毒素的定量分析，可滿足96次測試，在做復(fù)孔的情況下，一次可檢測42個樣本。

一、使用須知：

1. 當(dāng)與儀器方法結(jié)果相比時，試劑盒的結(jié)果偏高這是很正常的現(xiàn)象。因為儀器方法僅測量的單一化合物，而試劑盒中的抗體由于不僅能識別目標(biāo)分子且還能識別結(jié)構(gòu)上相似的分子，包括其相關(guān)的代謝產(chǎn)物。因此，使用人員需要明白本產(chǎn)品的局限性和對數(shù)據(jù)做出合理的分析。

2. 任何試劑、檢測程序的改變都可能導(dǎo)致檢測失敗。

3. 不要使用超過有效期的產(chǎn)品；不同批次的產(chǎn)品不得混用。

4. 實驗用水的質(zhì)量很重要，請使用蒸餾水或去離子水。

5. 微孔板開封后，需置于有干燥劑的密封袋中冷藏保存，建議于一個月內(nèi)使用完。

二、需要但未提供的設(shè)備和試劑：

酶標(biāo)儀：配備450nm波長

單道移液器：0.5-10、20-200、100-1000μL、0.5-5mL量程各一支

多道移液器：30-300μL量程一支

白色、黃色和藍(lán)色吸頭若干
恒溫培養(yǎng)箱

均質(zhì)器或絞肉機

恒溫水浴鍋

分析純

乙酸，分析純

三、樣本前處理：
一般來說，組織樣本在2-8℃保存1-2天，如長時間不用，建議分裝成適量小份于-20或-80℃保存，請勿使用反復(fù)凍融的樣本。【注釋：廢棄的陽性樣本應(yīng)作為有毒廢棄物處理】

準(zhǔn)備

(1) 樣本提取液

分別量取40mL、蒸餾水60mL、冰乙酸0.1mL混勻。

(2) 1×sample diluent

按1份體積4×sample diluent和3份體積的蒸餾水混勻。

魚肉、魚皮

(1) 稱取2g均質(zhì)的樣本于一合適的容器中，加入10mL樣本提取液渦旋30s;

(2) 放置于90℃水浴中10min，期間手搖樣本3次；

(3) 自來水降溫1min，加入1mL 渦旋30s；4000rpm，離心5min；

(4) 取中間層清液100μL，加入300μL 1×sample diluent混勻，取50μL點樣

稀釋倍數(shù)：20
四、檢測步驟

檢測前準(zhǔn)備

所有試劑需回復(fù)至室溫（在20-25℃下，從試劑盒中取出并放置1-2h）;

檢測開始前需準(zhǔn)備好所需試劑；

取出所需體積的試劑，其余放回盒內(nèi)；

未使用完的試劑請勿倒回原試劑瓶內(nèi)，移取每一種試劑需更換吸頭，以免交叉污染；

請不要在通風(fēng)口、陽光直射下檢測，以避免造成微孔微環(huán)境差異導(dǎo)致檢測失敗；

標(biāo)準(zhǔn)品、陽性樣本以及用過的吸頭和器皿均應(yīng)做有毒廢棄物處理。

洗液（1×）配制

取1體積的20×濃縮洗液，加入19體積的去離子水或蒸餾水混勻

檢測步驟

(1) 移取50μL河豚魚毒素標(biāo)準(zhǔn)品至相應(yīng)微孔中；

(2) 移取50μL樣本至相應(yīng)微孔中；

(3) 移取50μL酶結(jié)合物至所有微孔中；

(4) 加入50μL河豚魚毒素抗體至每一所需微孔中，用手指肚輕輕敲擊微孔板架兩側(cè)混勻1min；

(5) 室溫（20-25℃）孵育30min；

(6) 甩干微孔板，加入300μL 洗液（1×），浸泡5s后倒出洗液，再重復(fù)4次，甩干并于無塵布上拍干；

(7) 加入100μL底物，室溫（20-25℃）避光孵育15min;

(8) 加入100μL終止液，于450nm下讀數(shù)

五、結(jié)果計算

（1）以logit(B/B0）為y軸，以log（分析物濃度）為x，進(jìn)行線性擬合。

其中公式如下

logit(B/B0)=k ln 〖(concentration)+c〗①

B為標(biāo)準(zhǔn)品或樣本對應(yīng)的吸光度；

B0為零標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)的吸光度；

logit(B/B0)=〖ln(〗 〖(B/B0)/(1-B/B0))〗;

K為斜率；

C為截距

（2）計算出樣本的平均吸光度和樣本的B/B0值代入公式①中求出濃度并乘以對應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即為樣本中待測物最終濃度。