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超微量Na+K+—ATP酶測試盒的組成和操作原理

時間:2015/8/5閱讀:772
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超微量Na+K+—ATP酶測試盒的組成和操作原理

一、ATP酶存在于組織細胞及細胞器的膜上,是生物膜上的一種蛋白酶,它在物質(zhì)運送、能量轉(zhuǎn)換以及信息傳遞放免具有重要的作用,機體在缺氧及一些疾病狀態(tài)下,此酶活力發(fā)生一系列改變,另外有些遺傳疾病也與此酶活力有關。

二、測定原理:

ATP酶可分解ATP生成ADP及無機磷,測定無機磷的量可判斷ATP酶活力的高低。

三、試劑組成和配置:



組分

50T/25

100T/50

保存

試劑一

液體

13ml X 1

13ml X 2

4℃保存6個月

試劑二

液體

4ml X 1

4ml X 2

4℃保存6個月

試劑三

粉劑

粉劑X 4

粉劑X 8

-20℃保存6個月

試劑三的配制:用時每支試劑三粉劑加雙蒸餾水1ml,充分溶解。(用不完-20℃以下可保存一周。)

試劑四

液體

5ml X 1

5ml X 2

4℃保存6個月

試劑五

甲液

7ml X 4

7ml X 8

4℃保存6個月

乙液

6ml X 1

6ml X8

4℃避光保存6個月

注:試劑五乙液在冬天或4℃長時間保存時可能會出現(xiàn)凝膠狀物質(zhì),37℃溶解不了,可將其60℃左右水浴10分鐘即可*溶解;甲液、乙液應防止磷污染。

試劑六

液體

50ml X 1

50ml X 2

室溫保存6個月

試劑七

10mmol/L

標準磷貯備液

5ml X 1

5ml X 1

4℃保存6個月

試劑十

貯備液

0.1ml X 3

0.1ml X6

4℃保存6個月

稀釋液

0.9ml X 3

0.9ml X6

4℃保存6個月

試劑十的配制:取一支試劑十稀釋液加入一支試劑十貯備液中,用不完的4℃保存。

0.1umol/ml標準磷應用液的配制:用時將10mmol/L磷貯備液100倍稀釋,即取0.1ml加雙蒸水至10ml

0.02umol/ml磷標準液的配制:用時將0.1umol/ml磷標準液用雙蒸水5倍稀釋,即取0.1umol/ml磷標準液1ml加雙蒸水4ml

基質(zhì)液的配制: 按試劑一:試劑二:試劑三=2608080比例混合。需多少配多少,現(xiàn)用現(xiàn)配

顯色劑的配制:用時取一瓶試劑五甲液加入一瓶已預溫好試劑五乙液中,充分混勻,需提前0.5小時配制,2--8℃條件下至少可保存5天,配好的顯色劑的量夠做13個管子(如果你的樣本量很少,所需的顯色劑的量較少,那么你可以按試劑五的甲液:乙液=7:6的比例自行配制顯色劑,需多少配多少(按比例配制顯色劑時要防止磷污染,用吸嘴)。

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