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1.第二抗體沉淀法
其原理是用RIA反應(yīng)中的試劑抗體(一抗)如豚鼠的IgG免疫另一種動(dòng)物(如羊),制得羊抗豚鼠IgG血清(一抗)。RIA反應(yīng)結(jié)束時(shí),加入二抗,使其形成抗原-一抗-二抗的雙抗體復(fù)合物;但因一抗含量甚微,此復(fù)合物也少,不易離心分離,一般還需加入一定量的與一抗同種動(dòng)物的血清或IgG,使其與二抗形成較大量的可見沉淀物,與雙抗體復(fù)合物共沉淀;離心后,即可有效地分離B和F。也可將二抗與某些顆粒固相物連接,制成固相二抗,分離B、F效果也好。
2.聚乙醇(PEG)沉淀法
PEG能非特異地沉淀抗原抗體復(fù)合物等大分子蛋白質(zhì),而不沉淀小分子抗原,因此PEG被廣泛用于RIA實(shí)驗(yàn)作沉淀劑。其優(yōu)點(diǎn)是沉淀*,經(jīng)濟(jì)方便,但非特異性沉淀較多,且當(dāng)溫度高于30~C時(shí),沉淀物易復(fù)溶。
3.PR試劑法
先將二抗與PEG按一定比例混合成懸液后進(jìn)行試驗(yàn)。是將二抗法和PEG法沉淀原理相結(jié)合的方法。此法保留了二者的優(yōu)點(diǎn),節(jié)省了二者的用量,且分離迅速,簡(jiǎn)便。
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活性炭可吸附小分子游離抗原或半抗原,而大分子蛋白(如抗體和免疫復(fù)合物)則留在溶液中??乖贵w反應(yīng)后,加入活性炭顆粒,使游離的標(biāo)記抗原(F)吸附到顆粒上,再離心使顆粒沉淀,上清液中含有的標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物(B)供測(cè)定。該法主要用于測(cè)定小分子抗原或藥物的RIA。
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