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β—半乳糖苷酶標(biāo)記試劑

時(shí)間:2010-10-22閱讀:306
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β—半乳糖苷酶標(biāo)記試劑

β—半乳糖苷酶已被廣泛用于酶標(biāo)記免疫分析,但主要用于免疫細(xì)胞化學(xué)。一種較好的底物是5—溴—4—氯—3—吲哚—β—D—吡喃型半乳糖苷(BCIG),它可以產(chǎn)生一種深藍(lán)色的產(chǎn)物。此產(chǎn)物在乙醇和水中穩(wěn)定,不溶解。

1.需要的溶液、試劑和特殊設(shè)備
BCIG;
N,N—二甲基甲酰胺;
1mmol/LMgCl2;
3mmol/L亞鐵氰化鉀用PBS溶解,DPX。
光學(xué)顯微鏡(通常帶有照相機(jī)以便于記錄結(jié)果)。

2.操作步驟
(1)用0.1mlDMF溶解4.9mgBCIG。
(2)加0.1mlBCIG溶液至10ml含有1 mmol/L MgCl2 3retool/L亞鐵氰化鉀的PBS中。
(3)濾紙過濾。
(4)加此溶液至標(biāo)本,在室溫孵育10~40min,用水沖洗終止反應(yīng)。
(5)優(yōu)化:如果需要,進(jìn)行復(fù)染。
(6)用DPX封片。

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