孕馬血清腺激素的生物學測定

一.實驗特點
實驗類型：設計型實驗 實驗類別：專業(yè)基礎課
計劃學時：4學時 每組人數(shù)： 4～5人
二．實驗目的要求
生物學測定法是根據(jù)一些動物的靶器官和靶組織對激素反應程度來測定激素含量的方法，是zui早應用于激素測定的經(jīng)典方法，能夠直接反應激素的生物活性，也稱作激素的生物學效價，其它的測定方法往往以此種方法加以驗證。要求學生通過孕馬血清*的活性測定，掌握激素的生物學測定方法。
三．實驗原理
PMSG的生物學測定法是以即將達到性成熟或摘除垂體的小鼠或大鼠，注射含有待測激素樣品后，觀察其子宮或卵巢增重及卵泡發(fā)育等變化。凡是引起確定的生理變化的zui低有效劑量，即相當于一個效價單位（如小鼠單位或大鼠單位）。
母馬在妊娠的40天，PMSG開始出現(xiàn)，增長至70天達到，持續(xù)到120天，每升血液中可達7萬單位以上，然后開始下降，大約在170天時降到幾乎測不出的程度。 PMSG 能促進動物卵巢機能，進而引起子宮增生和生長的變化。以性未成熟的小白鼠子宮增大程度為測定活性的根據(jù)，來測定該激素引起小白鼠子宮陽性反應的zui低濃度，來進行計算預測定的PMSG樣品的活性。即為能引起未成熟的小白鼠子宮增大一倍PMSG的量稱之一個小白鼠單位。
四．實驗動物和器材
1.同品系20～21日齡，體重10～12g性未成熟的雌性健康小白鼠25只（每一實驗教學組）。
2.含PMSG血清樣品或稀釋的PMSG和滅菌生理鹽水。
3.5ml注射器5只，5號小針頭5只，試管架1個，1ml、2ml、5ml、10ml吸量管各一支，吸耳球一個，10 ml試管5支，20ml試管二支，剪子，鑷子。
五．實驗內(nèi)容步驟
1. 將25只小白鼠隨機分為5組，每組5只，其中4組為實驗組，另一組做為對照組。
2. 取滅菌后的試管4支，分別加人生理鹽水11、2、4、6ml，吸取1ml樣品血清或PMSG稀釋液加人到*支試管中，充分混勻。再取此試管的稀釋血清在其他三支試管中各加入2ml，混勻后其血清濃度分別為1/12，1/24，1/36 和1/48。
3. 用4種濃度的稀釋血清各注射小白鼠5只，每只小白鼠腹部皮下注射0.2ml。要求注射部位準確，不得外漏，各組小鼠不得混串。
4. 另外5只小白鼠按相同劑量注射生理鹽水，作為對照組。
5. 注射后按常規(guī)飼養(yǎng)，待72小時后剖檢，并與對照組相比較觀察子宮增大情況，每組若有3只或3只以上的小白鼠子宮呈陽性反應（增大一倍以上），則認為該組濃度為陽性組。
6. 將zui低的有效濃度血清分母乘5，所得的數(shù)值即為每ml血清樣品中含有*的小白鼠單位。
六．實驗結(jié)果
1．所有實驗組均為陰性
2．所有實驗組均為陽性
*種情況說明稀釋倍數(shù)低了，第二種情況稀釋倍數(shù)高了