電化學(xué)發(fā)光（ECL）原理及操作，電化學(xué)發(fā)光 （ECL） 是通過在電極上施加一定波形的電壓或電流信號(hào)進(jìn)行電解反應(yīng)的產(chǎn)物之間或與體系中共存組分反應(yīng)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光的現(xiàn)象。

電致化學(xué)發(fā)光（ECL）

ECL與CL的差異在于ECL是電啟動(dòng)發(fā)光反應(yīng)，而CL是通過化合物混合啟動(dòng)發(fā)光反應(yīng)。因此ECL反應(yīng)易控制，具有靈活性。

電化學(xué)發(fā)光劑

定義：指通過在電極表面進(jìn)行電化學(xué)反應(yīng)而發(fā)出光的物質(zhì)。

特點(diǎn)：
反應(yīng)在電極進(jìn)行
化學(xué)發(fā)光劑：三聯(lián)毗啶釕
電子供體為：三丙胺（TPA）
三聯(lián)毗啶釕分子結(jié)構(gòu)圖
三聯(lián)吡啶釕 （ [Ru（bpy）3]2+ ）特點(diǎn)

ECL分析中采用[Ru（bpy）3]2+作為標(biāo)記物，其活化衍生物是[Ru（bpy）3]2+＋N羥基琥珀酸胺酯（NHS） ，該衍生物具有水溶性，且高度穩(wěn)定，保證電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的和穩(wěn)定，而且避免了本底噪聲的干擾。

，三聯(lián)吡啶釕（ [Ru（bpy）3]2+ ）特點(diǎn)
[Ru（bpy）3]2+衍生物與免疫球蛋白結(jié)合的分子比超過20仍不會(huì)影響抗體的可溶性和免疫活性；
[Ru（bpy）3]2+分子量小，空間位阻小 ，即便小分子的核酸也能標(biāo)記，使檢測(cè)的菜單大大豐富，更重要的是為其檢測(cè)菜單的開發(fā)前景提供了廣闊空間。

，電化學(xué)發(fā)光原理圖

ECLI是繼EIA、RIA、FIA、時(shí)間分辨熒光免疫技術(shù)（TRFIA）之后的新一代標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù)；
ECLI是電化學(xué)發(fā)光（ECL）和免疫測(cè)定相結(jié)合的產(chǎn)物；
ECLI是目前的標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù)之一。

ECLI原理
在電極表面由電化學(xué)引發(fā)的特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，用電化學(xué)發(fā)光劑三聯(lián)吡啶釕[Ru（bpy）3]2+標(biāo)記Ab，通過Ag-Ab反應(yīng)和磁珠分離技術(shù)，根據(jù)三聯(lián)吡啶釕在電極上發(fā)出的光強(qiáng)度對(duì)待測(cè)的Ag或Ab進(jìn)行定量/定性。

方法評(píng)價(jià)
采用的固相載體是帶有磁性的直徑約2.8 μm的聚苯乙烯微粒。其特點(diǎn)是反應(yīng)面積比板式擴(kuò)大20－30倍，吸附效率高；在液體中形成均勻的懸液，參與反應(yīng)時(shí)類似液相，反應(yīng)速度大大加快；
“鏈霉親和素-*”是是具有很強(qiáng)的非共價(jià)相互作用的一對(duì)化合物，具有牢固而特異的結(jié)合，應(yīng)用此放大系統(tǒng)，使檢測(cè)的靈敏度大大提高；
利用氧化鐵的磁性，使用電磁場(chǎng)分離結(jié)合態(tài)和游離態(tài)，方便迅速，實(shí)現(xiàn)了的全自動(dòng)化；
標(biāo)記物的再循環(huán)利用，使發(fā)光時(shí)間更長(zhǎng)、強(qiáng)度更高、易于測(cè)定。

ELIA*性
高度敏感，可達(dá)pg／ml或pmol水平；
特異性強(qiáng)，重復(fù)性好，CV＜5％。
測(cè)定范圍寬，可達(dá)7個(gè)數(shù)量級(jí)。
試劑穩(wěn)定，無毒害，無污染，有效期長(zhǎng)，達(dá)數(shù)月甚至數(shù)年。
操作簡(jiǎn)單，耗時(shí)短，易于自動(dòng)化。
在對(duì)環(huán)保很重視的國(guó)家，CLIA成了取代RIA的方法。

臨床應(yīng)用
激素
腫瘤標(biāo)記物
內(nèi)分泌功能
傳染性疾病
其它：如VB12、*、鐵蛋白、肌鈣蛋白、肌紅蛋白、酶、脂肪酸、維生素和藥物等多種檢測(cè)項(xiàng)目，。