人（human）血管內(nèi)皮生長因子VEGF 
本試劑僅供研究使用  標本：細胞培養(yǎng)上清液

一、試 劑 組 成
1、精密度微孔板Microtest Plates 96 wells            2、酶標偶合液Enzyme Conjugate   12.0ml
3、標準品Standard 　5 x 1.0ml                     4、呈色劑A、Substrate  A  6.0ml
5、呈色劑B、Substrate B  6.0ml                   6、終止液Stop Solution  6.0ml  
7、濃縮洗滌液（1：20）Rinsing Buffer 60.0ml        8、5倍樣品稀釋液  dilution 15.0m

二、注意事項
1.  此試劑為體外檢測試劑，效期內(nèi)使用，試劑應(yīng)視為傳染物，不同總批號的試劑不能混用。
2． 使用前應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出。室溫放置至少30分鐘，
3． 濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶后，請于37℃孵育15分鐘。
4． 濃縮樣品稀釋液出現(xiàn)結(jié)晶后，請于37℃孵育15分鐘
5． 若24小時內(nèi)進行實驗，標本可存放于2～8℃。不需及時實驗，標本-20℃保存，避免反復(fù)凍融。
6． 在沖洗微孔板過程中，務(wù)必反復(fù)清洗干凈，并扣干微孔中的殘余液體，否則將降低度，造成吸光度偏離的假像。
7． 加樣完畢后，應(yīng)注意輕微搖動微孔反應(yīng)條，以便使孔中的液體充分混勻。
8． 試劑盒保存于2～8℃，請勿冷凍，有效期請見盒內(nèi)標示。

三、實驗前準備
1．使用前應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出，室溫放置至少30分鐘。
2．準備各種實驗儀器及材料，如微量移液器，吸頭，醫(yī)用蒸餾水等
3．濃縮洗液與醫(yī)用蒸餾水1︰19倍稀釋后成為應(yīng)用洗滌液
4．濃縮樣品稀釋液與醫(yī)用蒸餾水1︰4倍稀釋成應(yīng)用樣品稀釋液
5．用應(yīng)用樣品稀釋液來稀釋樣品，按照1：100的體積比來稀釋樣品如10μl的樣品加入到1ml的應(yīng)用樣品稀釋液中，充分混勻待用。）

四、操 作 步 驟
1．取出酶標板，設(shè)空白孔，依照次序?qū)?yīng)分別加入100μl的標準品于空白微孔中（空白孔視為0號標準品，用醫(yī)用蒸餾水替代）
2、分別標記樣品編號，加入100μl的稀釋樣品于空白微孔中（不同的樣本采用不同的吸頭）。
3、將酶標板置于37℃溫育30分鐘；
4、將酶標板板取出，將其中的液體甩去，每個孔中全部加滿應(yīng)用洗滌液后，立即甩去液體;
5、每個孔中加滿應(yīng)用洗滌液后，輕微振搖酶標板30秒后將孔中的應(yīng)用洗滌液甩去，在吸水紙上將酶標板拍干。
6、重復(fù)第5個步驟5次，在吸水紙上將酶標板拍干。
7、在標準品孔和樣品孔中加入100μl的酶標偶合溶液。
8、將96孔板置于37℃溫育30分鐘。
9、將酶標板取出，將其中的液體甩去，每個孔中全部加滿應(yīng)用洗滌液后，立即甩去液體。
10、每個孔中再次加滿洗滌應(yīng)用液后，室溫輕微振搖酶標板30秒后將孔中的應(yīng)用洗滌液甩去，在吸水紙上將酶標板拍干。
11、重復(fù)第5個步驟5次，在吸水紙上將酶標板拍干。
12、在每個孔中加入底物A 50μl后立即加入底物B 50μl。輕輕振蕩混勻。（A液、B液采用不同的吸頭加樣）
13、將酶標板置于37℃避光溫育反應(yīng)15分鐘。
14、每個微孔中加入50μl的終止液，輕輕振蕩混勻。
15、在酶標儀上，450nm處測定OD; 顯色后，15分鐘內(nèi)進行測定。
16、根據(jù)制備的標準曲線，計算樣本含量

五、結(jié) 果 判 斷
儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值。
檢測值范圍：0 – 32ng/ml                    
    敏感度： 0.2 ng/ml