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1.標準品的制備:是非常復雜的問題,也是標記免疫分析中比較難于制備的一個成分。以下討論的是實驗室標準品(或商品化試劑中標準品)的制備。
1)基質(zhì)的制備:如前所述,作為標準品的介質(zhì)(基質(zhì))成分應與被測樣品相同。對大多數(shù)用于測定血清中某物質(zhì)的標準品,應用不含被測物質(zhì)的零血清制備,以求反應的介質(zhì)環(huán)境相當。但有時零值血清的制備十分困難,所以有些標準品用適當?shù)木彌_液制備,并在緩沖液中加入一定量的載體蛋白(一般用1%~2%的牛血清白蛋白),以便使其與樣品的介質(zhì)環(huán)境相近。
零值血清的制備方法有:
(1)吸附法:血清中小分子物質(zhì)如三碘甲狀腺原氨酸(T3)、甲狀腺素(T4)等,可用活性炭吸附去除。這種方法簡便,但待測物質(zhì)難以清除干凈,而且大分子活性物質(zhì)不能用此法進行制備。
(2)反復凍融法:對大分子活性物質(zhì)可選用低值血清,經(jīng)反復凍融使被測物質(zhì)失活。用這種方法可使某些蛋白類激素大部分失活,但也難以得到真正的零值血清。
(3)親和層析法:用特異性抗體制備親和層析柱,用以吸附被測抗原。用這種方法可以得到高質(zhì)量的零值血清,但本法比較復雜而且成本也高。
2)標準物純品的選擇:應選擇高化學純和高免疫純的純品作標準品。其中免疫純尤為重要,在標準品中不應含有與被測物質(zhì)有交叉反應的物質(zhì)。
3):先用零值血清配置高濃度的標準品,然后根據(jù)實驗系統(tǒng)的要求,用零值血清將高值血清稀釋至應有的濃度,制成符合預定要求的,由不同濃度組成的系列標準品。
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