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技術(shù)文章

SPE固相萃取的技術(shù)原理及操作步驟

閱讀:120發(fā)布時間:2025-12-20

SPE固相萃取技術(shù)的介紹說明

一. 固相萃取概念及基本原理:
   
固相萃取(Solid Phase Extraction,簡稱
)是從八十年代中期開始發(fā)展起來的一項樣品前處理技術(shù)。由液固萃取和液相色譜技術(shù)相結(jié)合發(fā)展而來。主要通過固相填料對樣品組分的選擇性吸附及解吸過程,實現(xiàn)對樣品的分離,純化和富集。主要目的在于降低樣品基質(zhì)干擾,提高檢測靈敏度。
   
固相萃取
的基本原理和方法:
    SPE技術(shù)基于液-固相色譜理論,采用選擇性吸附、選擇性洗脫的方式對樣品進行富集、分離、純化,是一種包括液相和固相的物理萃取過程;也可以將其近似的看作一種簡單的色譜過程。
   
)是利用選擇性吸附與選擇性洗脫的液相色譜法分離原理。較常用的方法是使液體樣品通過一吸附劑,保留其中被測物質(zhì),再選用適當強度溶劑沖去雜質(zhì),然后用少量良溶劑洗脫被測物質(zhì),從而達到快速分離凈化與濃縮的目的。也可選擇性吸附干擾雜質(zhì),而讓被測物質(zhì)流出;或同時吸附雜質(zhì)和被測物質(zhì),再使用合適的溶劑選擇性洗脫被測物質(zhì)。
二.
方法的優(yōu)點
    相對于傳統(tǒng)的液液萃取法和蛋白沉淀法,
具有的優(yōu)勢:
    凈化方法:LLE(液液萃取)
    優(yōu) 點:無需特殊裝置和材料
    缺 點:

    1.操作繁瑣,費時
    2.需要耗費大量的有機溶劑,導(dǎo)致高成本和對環(huán)境的污染
    3.難以從水中提取高水溶性物質(zhì)   
    凈化方法:PPT(蛋白沉淀)
    優(yōu) 點:操作簡單,無需特殊裝置
    缺 點:

    1.非特異性的沉淀反應(yīng)可能使微量的分析物隨著基質(zhì)蛋白質(zhì)共同沉淀而損失
    2.凈化效果較弱,檢測靈敏度和可靠性低   
    凈化方法:SPE(

    優(yōu) 點:

    1.集樣品富集及凈化與一身,提高檢測靈敏度的方法
    2.比液液萃取更快,節(jié)省溶劑
    3.可自動化批量處理
    4.重現(xiàn)性好
    缺 點:

    1.使用進口固相萃取小柱的成本較高
    2.需要專業(yè)人員協(xié)助方法開發(fā)  
三.
及基本操作步驟
    1.
    (1)SPE小柱
    關(guān)于

    a.常見的固相萃取柱分為三部分:聚丙烯柱管,多孔聚丙烯篩板(20μm)和填料(多為40-60μm,80-100μm)
    b.常見規(guī)格:100mg/1ml,200mg/3ml,500mg/3ml,1g/6ml等。以100mg/1ml為例,其中100 mg
    為填料的質(zhì)量,1ml是空柱管的體積。
    c.一次性使用:為避免交叉污染,保證檢測可靠性,
通常是一次性使用的。
    2)96孔板
    96孔板是高通量的SPE產(chǎn)品,每孔含少量吸附劑(10-100mg),樣品載量約2ml/孔主要用于生物,醫(yī)藥等行業(yè)小量的多樣品的凈化處理。且多與自動化的樣品處理處理裝置連用(如Tomtec液體處理工作站)。其基本原理和使用方法與SPE柱相似。
    2.
 (  
    (1)真空SPE裝置(SPE Vacuum Manifolds)組成:玻璃缸,真空壓力表,
,真空緩沖瓶,收集管架,小柱連接頭,大體積取樣器,12位或24位防交叉污染裝置。
    標配StopCock閥,精確控制流速
    試管架高度可調(diào),滿足不同體積需要
    壓力表放空閥側(cè)面設(shè)計,使用方便
    設(shè)計緊湊、經(jīng)久耐用、性價比高
    2)

    a.醫(yī)藥/環(huán)保/刑事鑒定中自動樣品前處理
    b.自動進行固相萃取/可多組份收集
    c.無人為影響,無乳化,節(jié)省溶劑
    d.高回收率,高重現(xiàn)性,高效率適用于各種商品萃取柱
    e.自動記錄資料,便于GLP管理
    f.特別適合于HPLC或LC/MS的樣品處理
    g.價格較高
    3.基本操作步驟
    針對填料保留機理的不同(填料保留目標化合物或保留雜質(zhì)),操作稍有不同。
    1)填料保留目標化合物
    固相萃取操作一般有四步:
    活化——除去柱子內(nèi)的雜質(zhì)并創(chuàng)造一定的溶劑環(huán)境。
    上樣——將樣品用一定的溶劑溶解,轉(zhuǎn)移入柱并使組分保留在柱上。
    淋洗——除去干擾物。
    洗脫——用小體積的溶劑將被測物質(zhì)洗脫下來并收集。
    2)填料保留雜質(zhì)
    固相萃取操作一般有三步:
    活化——除去柱子內(nèi)的雜質(zhì)并創(chuàng)造一定的溶劑環(huán)境。
    上樣——將樣品轉(zhuǎn)移入柱,此時大部分目標化合物會隨樣品基液流出,雜質(zhì)被保留在柱上。故此步驟要開始收集。
    洗脫——用小體積的溶劑將組分淋洗下來并收集。合并收集液。
    此種情況多用于食品或農(nóng)殘分析中去除色素。


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