上海寶特生命科學(xué)有限公司
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更新時(shí)間:2018-05-14 09:00:00瀏覽次數(shù):319次
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微囊藻毒素檢測(cè)試劑盒適用于水中微囊藻毒素的定量檢測(cè)。 檢測(cè)原理 Auvon?微囊藻毒素檢測(cè)試劑盒由可以和微囊藻毒素及微囊藻毒素酶標(biāo)記物結(jié)合的多克隆抗體制成。樣品中的微囊藻毒素與微囊藻毒素酶標(biāo)記物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合數(shù)量有限的抗體結(jié)點(diǎn)。檢測(cè)過程中, 先加入微囊改造毒素酶標(biāo)記物及含有微囊藻毒素的樣品到測(cè)試孔中接著加入抗體,酶標(biāo)記物與樣品中的微囊藻毒素競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合同樣的抗體的結(jié)合點(diǎn)。測(cè)試孔中包被有抗兔IgG,用于捕獲加入的兔抗微囊藻毒素抗體。孵育30分鐘后洗掉小孔中所有沒有結(jié)合的分子。每孔中加入干凈的底物溶液,連接的酶結(jié)合物可以將底物轉(zhuǎn)化成藍(lán)色化合物,一個(gè)酶分子可以轉(zhuǎn)化多個(gè)底物分子。由于各個(gè)孔中抗體可結(jié)合位點(diǎn)是相同的,并且加入的微囊藻毒素酶標(biāo)記物的量也是相同的,樣品中微囊藻毒素含量低的則酶標(biāo)記物結(jié)合得多,顏色會(huì)顯深藍(lán)色。反之,樣品中微囊藻毒素含量高的則酶標(biāo)記物結(jié)合得少,顏色會(huì)顯淺藍(lán)色。注意:顏色與微囊藻毒素的含量成反比。較深的顏色=較低的濃度較淺的顏色=較高的濃度 特性:特異性 Auvon?微囊藻毒素檢測(cè)試劑盒沒有區(qū)分微囊藻毒素-LR(作為標(biāo)準(zhǔn)品)及其它類型,然而可以測(cè)到微囊藻毒素的其它類型,以下表格中展示的是相關(guān)值及交叉反映率(%CR),以下所有濃度均為ppb級(jí)。種類 %CR 微囊藻毒素-LR 100 微囊藻毒素-RR 87 微囊藻毒素-YR 48 Nodularin 31
注意
1. 不用時(shí)請(qǐng)將試劑盒儲(chǔ)存于4-8℃。
2. 不可冷凍試劑盒,不可使其暴露在大于37℃環(huán)境中。
3. 開始實(shí)驗(yàn)前,所有試劑達(dá)到室溫。
4. 不可使用過期試劑。
5. 不同批次的試劑不可混用。
6. 使用確證方法確認(rèn)陽(yáng)性樣品。
試劑盒組成
1. 包被有羊抗兔抗體的的微孔板 (12×8條)
2. 陰性對(duì)照品一瓶(0ppb微囊藻毒素-LR)
3. 0.1ppb,0.3ppb,0.8ppb,2ppb微囊藻毒素-LR標(biāo)準(zhǔn)品各一瓶
4. 1.0ppb微囊藻毒素質(zhì)控樣品一瓶
5. 微囊藻毒素HRP酶標(biāo)記物一瓶
6. 兔抗微囊藻毒素抗體溶液一瓶
7. 底物一瓶
8. 停止液一瓶(注意!1N 鹽酸,小心處理)
9. 100×清洗液 需要設(shè)備酶標(biāo)儀薄膜計(jì)時(shí)器或表蒸餾水或去離子水振蕩器
檢測(cè)程序
1. 將所有試劑及樣品置于室溫下。
2. 從鋁箔袋中拿出要求數(shù)量的微孔條,放入干燥劑并重新封好袋子以免微孔條受潮。
3. 稀釋100倍濃縮清洗液為1倍清洗液,例:取5ml 100倍清洗液到500ml洗瓶中并加入495ml蒸餾水。
4. 吸取50ul酶標(biāo)記物到微孔板的每個(gè)孔中。
5. 吸取50ul標(biāo)準(zhǔn),陰性對(duì)照,樣品到對(duì)應(yīng)微孔中,必須保證每種溶液使用干凈的吸頭吸取,避免交叉污染。
6. 加入50ul抗體溶液到每個(gè)小孔中。
7. 快速震蕩使孔中的溶液混合,并敷上薄膜,或者微孔板可以放在振蕩器上震蕩孵育,從而達(dá)到在孵育期間持續(xù)震蕩的效果。
8. 孵育30分鐘。
9. 孵育完后,去掉封口膜將微孔中的溶液倒入水槽中,用1倍清洗液清洗*充滿微孔,震蕩后倒掉,重復(fù)四次,總共五次洗板。在吸水紙上拍打,盡可能將水拍干。
10. 每個(gè)微孔中加入100ul底物溶液。
11. 蓋上小孔并孵育30分鐘。
12. 按照加底物的順序每孔中加入100ul停止液。停止液為1 N鹽酸,需小心操作。
13. 450nm下讀板,如果酶標(biāo)儀有雙波長(zhǎng),可同時(shí)測(cè)605或650nm雙波長(zhǎng)。
14. 如果酶標(biāo)儀可以處理數(shù)據(jù),可用半對(duì)數(shù)線性或4參數(shù)曲線擬合,如果為手動(dòng)計(jì)算,則可按照以下部分進(jìn)行。
計(jì)算結(jié)果
1. 讀板之后,求標(biāo)準(zhǔn),陰性對(duì)照,樣品的平均吸光度值并按以下方法計(jì)算%B0: 標(biāo)準(zhǔn),陰性對(duì)照,樣品吸光度值的平均值 %B0 = 陰性對(duì)照的平均吸光值
2. 以%B0為Y軸,以微囊藻毒素標(biāo)準(zhǔn)濃度的半對(duì)數(shù)值為X軸,繪制曲線。 3. 通過每個(gè)樣品的B0%,在圖上計(jì)算出微囊藻毒素的濃度。
4. 如果樣品B0%在設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)B0%范圍之內(nèi),就可以得出一個(gè)具體的濃度值。如果樣品B0%出了范圍只能說明樣品的濃度大于高濃度的標(biāo)準(zhǔn)或低于低濃度的標(biāo)準(zhǔn)。
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