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閱讀：1816發(fā)布時(shí)間：2013-6-25
摘要: 我們知道煙草種子內(nèi)部蟲害中心空洞、胚芽的發(fā)育情況、大小、形狀、數(shù)量可以用農(nóng)用X光機(jī)進(jìn)行觀察，而發(fā)芽環(huán)境的創(chuàng)建可以使用種子發(fā)芽箱進(jìn)行操作，不過我們?cè)趺纯梢蕴崆安扇〈胧┦篃煵莘N子的這些發(fā)育良好呢，本實(shí)驗(yàn)就是針對(duì)該種情況進(jìn)行研究的，該實(shí)驗(yàn)采用平板培養(yǎng)測(cè)定的方法分別對(duì)云南省的8個(gè)煙草種子生產(chǎn)基地的煙草種子內(nèi)部進(jìn)行帶菌檢測(cè)和分離鑒定。結(jié)果表明，8個(gè)樣品中，樣品帶菌檢出率高達(dá)87.5%； 除楚雄煙草種子生產(chǎn)基地外其他基地的煙草種子都存在不同程度的帶菌， 帶菌率在0%~ 16.25%。鑒定引起種子內(nèi)部攜帶的真菌發(fā)現(xiàn)煙草種子內(nèi)部攜帶的真菌有鏈格孢菌（ Alternaria alternaaata） 、鐮刀菌（ Fusairium spp） 、腐霉（ Pythium spp） 、芽枝孢菌（ Cladosporium spp） ， 優(yōu)勢(shì)菌群主要為鏈格孢菌， 樣品檢出率為87.5%，在檢測(cè)培養(yǎng)的真菌物中出現(xiàn)的頻率為56.25% ~ 。煙草是云南省栽培面積和產(chǎn)量均居全國(guó)*的主要經(jīng)濟(jì)作物， 在云南的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中具有極其重要的地位。播種前對(duì)煙草種子進(jìn)行藥劑處理是提高煙草種子播種質(zhì)量、煙苗抗病能力的經(jīng)濟(jì)有效、簡(jiǎn)便易行的措施。煙草種子處理是建立在煙草種子帶菌檢測(cè)和煙草種傳病害發(fā)生規(guī)律基礎(chǔ)之上的一項(xiàng)綜合研究技術(shù)。國(guó)內(nèi)外的種子病理學(xué)工作者在這方面做了大量研究。煙草種子是很多病原物的攜帶者，可導(dǎo)致苗期和大田期煙草病害的發(fā)生。本試驗(yàn)對(duì)云南省的主要煙草生產(chǎn)區(qū)的種子內(nèi)部真菌進(jìn)行帶菌檢測(cè)、分離鑒定，旨在為煙草種子的田間生產(chǎn)及其加工處理提供參考和理論依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 材料
供試煙草種子來自云南省昭通、曲靖陸良、玉溪江川、曲靖尋甸、紅河、楚雄、麗江、曲靖陸良等8 個(gè)主要煙草種子生產(chǎn)基地。培養(yǎng)基和PDA 培養(yǎng)基。
1.2 方法
1.2.1 煙草種子內(nèi)部真菌帶菌檢測(cè) 將煙草種子在75% 的酒精浸泡3 min，然后在1 j 的升汞浸泡3min，zui后用無菌水漂洗3 次。將消毒后的煙草種子按4 *4 方陣排列均勻擺放在直徑9 cm 的培養(yǎng)基平板上，每個(gè)處理10次重復(fù)。在28e培養(yǎng)箱中12h光照/黑暗交替下培養(yǎng)5~ 7 d，檢查、記錄種子的真菌帶菌情況。
1.2.2 真菌鑒定 將分離到的各種真菌轉(zhuǎn)移到PDA培養(yǎng)基進(jìn)行純化、轉(zhuǎn)管保存、鏡檢。根據(jù)真菌培養(yǎng)性狀和形態(tài)特征， 參考有關(guān)工具書和資料鑒定。
2 結(jié)果與分析
2.1 煙草種子內(nèi)部的真菌帶菌率來自不同產(chǎn)地的煙草種子真菌帶菌情況有較大的差異。其中來自昭通和曲靖陸良的煙草種子帶菌率較高， 分別達(dá)到16.25% 和11.25%； 而來自大理和紅河的種子帶菌率相對(duì)較低，只有0.625%和1.25%； 來自楚雄的煙草種子中未能檢測(cè)到帶菌。
2.2 煙草種子內(nèi)部帶菌微生物種類和帶菌率及其培養(yǎng)中出現(xiàn)的頻率檢驗(yàn)結(jié)果表明，煙草種子內(nèi)部攜帶真菌種類有鏈格孢菌（ Alternaria alternaaata） 、鐮刀菌（ Fusairium spp） 、腐霉（ Pythium spp） 、芽枝孢菌（ Cladosporium spp） 等4 種類型。不同產(chǎn)區(qū)的煙草種子所帶的真菌種類差異不大， 鏈格孢菌在培養(yǎng)的攜帶真菌中出現(xiàn)的頻率比較高， 來自昭通、曲靖陸良、紅河、大理等產(chǎn)地的為， 曲靖尋甸、玉溪江川、麗江等產(chǎn)地的均超過50% 。從玉溪江川產(chǎn)地的煙草種子內(nèi)部還分離到Cladosporium spp， 從曲靖尋甸產(chǎn)地分離到Fusairium spp， 從麗江產(chǎn)地分離到Fusairium spp 和Pythium spp， 這些表明種子產(chǎn)地來源和攜帶的真菌種類有一定的相關(guān)性。
3 討論
本試驗(yàn)采用平板培養(yǎng)檢測(cè)煙草種子內(nèi)部攜帶的真菌， 可較好地檢測(cè)煙草種子內(nèi)部真菌帶菌狀況， 多次重復(fù)， 重現(xiàn)性高； 而且所用培養(yǎng)基為已商業(yè)化生產(chǎn)的虎紅瓊脂。因此， 可以利用統(tǒng)一的培養(yǎng)基、統(tǒng)一的操作規(guī)程對(duì)煙草種子內(nèi)部進(jìn)行真菌帶菌檢測(cè)。固這種方法可推薦作為云南及全國(guó)煙草種子健康檢測(cè)的一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)方法之一。
本試驗(yàn)結(jié)果表明， 來自昭通、曲靖陸良、玉溪江川、曲靖尋甸、紅河、楚雄、麗江、大理等云南主要煙草種子基地的煙草種子內(nèi)部真菌帶菌有較大差別， 而帶菌的主要真菌種類差異不大。煙草內(nèi)部真菌帶菌的主要種類為鏈格孢菌， 其他還有鐮刀菌、腐霉和芽枝孢菌。鏈格孢菌是引起煙草主要葉斑病害、赤星病的病原， 煙草種子內(nèi)部攜帶該菌的檢出可能與煙草種子田間生產(chǎn)過程中感染赤星病有關(guān)。因此， 在煙草種子田間生產(chǎn)過程中應(yīng)加強(qiáng)對(duì)赤星病的防治以減少煙草種子攜帶真菌， 特別是病原真菌。至于煙草種子攜帶的鏈格孢菌是否會(huì)成為下年度煙草赤星病的初侵染源尚待進(jìn)一步研究， 而且確定煙草種子攜帶鏈格孢菌的量達(dá)到什么程度時(shí)需要進(jìn)行種子消毒處理， 對(duì)種子的加工具有重要的指導(dǎo)作用。
煙草種子內(nèi)部攜帶鐮刀菌、腐霉和芽枝孢菌， 而這些真菌本不是煙草葉部病害的病原菌， 這些真菌是通過何種途徑（ 如在煙草蒴果果皮上定殖、種子晾干過程中受潮等） 進(jìn)入煙草種子內(nèi)部（ 種皮） 的也需要進(jìn)一步明了。
實(shí)驗(yàn)后續(xù)，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)的種子再繼續(xù)用液晶顯示種子X光機(jī)觀察煙草種子內(nèi)部蟲害中心空洞、胚芽的發(fā)育情況、大小、形狀、數(shù)量，其生長(zhǎng)狀況一切良好，優(yōu)于未經(jīng)實(shí)驗(yàn)處理的煙草種子。
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