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延長色譜柱的使用壽命方法1

閱讀：155發(fā)布時間：2022-4-26

色譜柱的使用壽命，除了與所分析的樣品和流動相及使用頻率有關(guān)系外，主要的是與日常的委會密切相關(guān)。為延長色譜柱的使用壽命。色譜柱的使用壽命主要是分局柱效和柱壓兩個指標(biāo)來衡量，如果支色譜柱柱效太低或柱壓太，通常被認(rèn)為該色譜柱已經(jīng)結(jié)束。因此，延長色譜柱使用壽命的關(guān)鍵是，消除引起柱效下降和柱壓升的因素。
以下是色譜柱的日常維護方法：、流動相的PH應(yīng)在使用的范圍內(nèi)色譜柱除反相氰基柱PH1.5-9.0外，其反相色譜柱的PH范圍均為1.5-10，由于填料中存在Si-C和Si-O鍵，流動相超過其PH范圍將會導(dǎo)致硅膠基質(zhì)流失和鍵合相碳鏈斷裂，使柱效下降，使用壽命變短。由于流動相的PH 控制不當(dāng)而對色譜柱造成的損害，通常很難是色譜柱恢復(fù)，因此必須認(rèn)真對待，嚴(yán)格控制流動相的PH值。
、去除樣品和流動相中的固體顆粒樣品和流動相中含有的固體顆粒物質(zhì)會堵塞色譜柱篩板，篩板被堵住不僅會引起柱壓的升，而且也會引起柱效下降，因為篩板的堵塞會引起液流不均，導(dǎo)致色譜峰型拖尾、變寬，從而使柱效下降。因此，建議使用超純水和色譜純試劑，在分析樣品前對樣品進行針筒過濾，流動相過0.45μm濾膜。
三、使用保護柱或在線過濾器樣品和流動相經(jīng)過濾后并不能*消除固體顆粒物質(zhì)，因為泵的磨損、密封圈和管路的老化也會產(chǎn)生固體顆粒物質(zhì)，這些固體顆粒被流動相帶入色譜柱，堵塞篩板，導(dǎo)致柱壓升、柱效下降。保護柱和在線過濾器上都有篩板，其孔徑與色譜柱孔徑相同，因此可以阻止固體顆粒物質(zhì)到達色譜柱，有效防止色譜柱篩板的堵塞。由于柱壓升在分析故障中占很大比例，因此，除對樣品和流動相進行過濾外，建議您在色譜柱進樣端加上保護柱或在線過濾器。
如果色譜柱柱壓升是由于進樣端篩板被堵引起的，可選擇以下方式進行補救： 1、先在色譜柱前加上保護柱或在線過濾器，然后用甲醇、水=20/80ml/min反向沖色譜柱180min。 2、先在色譜柱進樣端加上保護柱或在線過濾器，然后反向使用。
四、正確使用緩沖鹽緩沖鹽通常易溶于水，難溶于有機溶劑，因此緩沖鹽使用不當(dāng)會使其析出，堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙，使填料板結(jié)，柱壓上升；同時阻礙了基質(zhì)上鍵合的碳鏈自由舒展，使色譜柱的保留能力下降，柱效降低。緩沖鹽析出后，去除非常困難，因此，正確的使用緩沖鹽對延長色譜柱使用壽命非常重要。正確使用緩沖鹽的目的是防止緩沖鹽析出，因此正確使用緩沖鹽的方法可歸結(jié)為句話：使用前要過濾，使用后要沖洗。具體方法如下： 1、等度條件：使用緩沖鹽前和使用后需用過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min；使用后去除緩沖鹽的另個方法是用過渡流動相以0.2ml/min流速沖洗色譜柱過夜。 2、梯度條件：用含有緩沖鹽的流動相跑梯度之前，用與初始流動相組成相同的過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min，再用該過渡流動相以1.0ml/min沖洗色譜柱120min。含緩沖鹽流動相的梯度設(shè)定應(yīng)盡量平緩，以避免梯度過程中緩沖鹽析出。注意：過渡流動相是指有機相和水相的組成與分析流動相相同，區(qū)別只是過渡流動相不含緩沖鹽。 3、緩沖鹽析出的補救方法： 1）方案1：用甲醇/20/80以1.0ml/min流速35攝氏度條件下反向沖洗色譜柱120min 2）方案2：用甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向沖洗色譜柱過夜。
五、防止強保留物質(zhì)在色譜柱上存留強保留物質(zhì)和大分子化合物在色譜柱中累積，對樣品中的化合物產(chǎn)生額外的保留行為，不僅引起峰型變寬、拖尾，使柱效下降，同時也會引起保留時間的變化，累積到定程度時還會導(dǎo)致柱壓升。由于強保留物質(zhì)和大分子化合物對色譜分離的影響是個累積效應(yīng)，需要定的時間才會體現(xiàn)出來，但對許多藥品特別是復(fù)雜樣品而言，很難判斷其是否是含有強保留物質(zhì)，因此要防止強保留物質(zhì)的累積，需要在每天的日常維護中用純甲醇或乙氰清洗色譜柱。清洗方法： 1、未使用緩沖鹽：每天分析完成后，先用上述方法除去緩沖鹽，然后再用甲醇或乙氰反向沖洗色譜柱60min。 2、使用過緩沖鹽：分析完成后，先用上述方法除去緩沖鹽，然后在用純甲醇或乙氰反向沖洗色譜柱60min 3、補救方法：水——乙氰——氯仿（或異丙醇）——乙氰——水，每步以1.0ml/min流速反向沖洗色譜柱60min。

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