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上海嘉鵬科技有限公司

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技術(shù)文章

大鼠Wnt-2b蛋白(WNT2b)酶聯(lián)mianyi檢測試劑盒使用說明書

閱讀：159發(fā)布時間：2022-4-29

使用前仔細閱讀本說明書。本酶聯(lián)mianyi試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理，來檢測大鼠Wnt2B，只能用于研究用途，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。
用途：用于大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中Wnt2B測定。
工作原理
本試劑盒采用的是雙抗體夾心酶聯(lián)mianyi吸附法（ELISA）測定樣品中大鼠Wnt2B水平。向預(yù)先包被了大鼠Wnt2B單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠Wnt2B，溫育；溫育后，加入標記的抗Wnt2B抗體。再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成mianyi復(fù)合物，再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入底物A、B，產(chǎn)生藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺與樣品中大鼠Wnt2B的濃度呈正相關(guān)。
試劑盒組成

試劑盒組成	48孔配置	96孔配置	保存
說明書	1份	1份
封板膜	2片（48）	2片（96）
密封袋	1個	1個
酶標包被板	1×48	1×96	2-8℃保存
標準品160ng/L	0.5ml×1瓶	0.5ml×1瓶	2-8℃保存
標準品稀釋液	3ml×1瓶	6ml×1瓶	2-8℃保存
鏈霉親和素-HRP	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
標記的抗WNT2B抗體	0.5ml×1瓶	1 ml×1瓶	2-8℃保存
顯色劑A液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
顯色劑B液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
終止液	3ml×1瓶	6ml×1瓶	2-8℃保存
濃縮洗滌液	（20ml×20倍）×1瓶	（20ml×30倍）×1瓶	2-8℃保存

需要而未提供的試劑和器材

37℃恒溫箱。
標準規(guī)格酶標儀。
精密移液器及一次性吸頭
蒸餾水，
一次性試管
吸水紙

注意事項

從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差
嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
為避免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。

洗板方法
手工洗板方法：甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。

自動洗板：如果有自動洗板機，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中
標本要求
1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
2．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
操作程序

標準品的稀釋：(本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。)

80ng/L	5號標準品	120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液
40ng/L	4號標準品	120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液
20 ng/L	3號標準品	120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液
10ng/L	2號標準品	120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液
5 ng/L	1號標準品	120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

2.根據(jù)代測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3.加樣：1）空白孔，空白對照孔不加樣品，標記的抗WNT2B抗體，鏈霉親和素-HRP，只加顯色劑A&B和終止液，其余各步操作相同；2）標準品孔：加入標準品50ul，鏈霉親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好抗體，故不加)；3）代測樣品孔：加入樣本40ul，然后各加入抗WNT2B抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul，蓋上封板膜，輕輕震蕩混勻，37℃溫育60分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6.顯色：每孔先加入顯色劑A50ul，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
7.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
8.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進行。
9.根據(jù)標準品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。

操作程序總結(jié)：

試劑盒性能：
1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上。
2.批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于9%和15%

檢測范圍：
檢測范圍：2ng/L -90ng/L

保存條件及有效期：

保存：2-8℃。
有效期：6個月(2-8℃)。

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大鼠Wnt-2b蛋白(WNT2b)酶聯(lián)mianyi檢測試劑盒使用說明書

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