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閱讀:129發(fā)布時間:2024-12-27
什么情況下我們才會使用超濾呢?一般是在蛋白質(zhì)濃縮和更換緩沖液這塊,其實超濾就是我們比較熟悉的膜分離技術(shù),它可用來分離溶液中極小的顆粒和溶解的分子。這種方法操作簡便,只要有濃縮離心管和離心機就可以完成我們想要的。超濾對被處理的分子比較溫和,操作簡單,也可以在低溫下進行,所以得到許多人的青睞。

操作濃縮離心管前,我們先選擇適當?shù)臐饪s離心管,加入樣本,按照離心管的規(guī)范要求進行,最后回收樣本。在離心力的作用下,溶液中的小分子溶質(zhì)和溶劑透過超濾膜,被收集在濾過液瓶中,而大分子溶質(zhì)被超濾膜截留在濃縮離心管中。所以選擇口碑好、高品質(zhì)的濃縮離心管非常重要。
如何選擇濃縮離心管呢?
1.按體積來說,不同的濃縮離心管適合處理不同體積的樣本。一般我們都是根據(jù)樣本來選擇的。不過,如果出現(xiàn)樣本濃度低,體積大的情況,我們可以選擇較小容積的濃縮離心管來反復(fù)多次進行離心工作。
2.選擇適當?shù)慕亓舴肿恿浚寒斘覀兇_定樣本后,就要選擇適當?shù)?/span>MWCO。對于蛋白質(zhì)而言,建議所選濾膜的MWCO是欲截留分子大小的1/6-1/3,截留孔徑越小,流速越慢,因此,如果流速是主要的考慮因素,建議選擇MWCO為1/3的濾膜;如果重點考慮截留比例,那么選擇更致密的膜。當然超濾膜對分子的截留是多個因素決定的。在截留分子量之外,還要考慮分子形狀、電荷、樣本濃度、樣本組成及操作條件。
3.濃縮:提到這點,大家相對會熟悉點,超濾可以很方便地濃縮經(jīng)過稀釋的蛋白質(zhì)樣本,以為它比較溫和,不會打斷DNA,也不會導(dǎo)致蛋白酶活的損失,當然也有回收率較高的優(yōu)點。
最后需要提醒的是,濃縮離心管是一次性的工具,不建議重復(fù)使用。
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