薄層色譜法(thin layer chromatography簡寫TLC)是一種物理化學(xué)的分離技術(shù)，常用于藥物的分離與分析。現(xiàn)對此方法的分析步驟及留意事項提點建議。 完成TLC分析通常需經(jīng)制板、點樣、展開、檢出4步操縱。 ⑴制板 在一平面支持物(通常為玻璃)上，均勻地涂制硅膠、氧化鋁或其他吸附劑薄層、樣品的分離、檢測就在此薄層色譜板上進行。 一般選用適當規(guī)格的表面光滑平整的玻璃板。常用的薄層板規(guī)格有：10cm×20cm、5cm×20cm、20cm×20cm等。稱取適量硅膠，加進0.2％～0.5%羧甲基纖維素鈉溶液（CMC-Na），充分攪拌均勻，進行制板。一般來說10cm×20cm的玻璃板，3～5g硅膠/塊；硅膠與羧甲基纖維素鈉的比例一般為1：2～1：4。制好的玻璃板放于水平臺上，留意防塵。在空氣中自然干燥后，置1l0℃烘箱中烘0.5～lh，取出，放涼，并將其放于紫外光燈(254nm)下檢視，薄層板應(yīng)無花斑、水印，方可備用。 ⑵點樣 用微量進樣器進行點樣。點樣前，先用鉛筆在層析上距末端lcm 處輕輕畫一橫線，然后用毛細管吸取樣液在橫線上輕輕點樣，假如要重新點樣，一定要等前一次點樣殘余的溶劑揮發(fā)后再點樣，以免點樣斑點過大。一般斑點直徑大于2mm，不宜超過5mm.底線距基線1～2．5cm，點間間隔為lcm左右，樣點與玻璃邊沿間隔至少lcm，為防止邊沿效應(yīng)，可將薄層板兩邊刮往1～2cm，再進行點樣。 ⑶展開 將點了樣的薄層板放在盛在有展開劑的展開槽中，由于毛細管作用，展開溶劑在薄層板上緩慢前進，前進至一定間隔后，取出薄層板，樣品組分固移動速度不同而彼此分離。 ① 展開室應(yīng)預(yù)飽和。為達到飽和效果，可在室中加進足夠量的展開劑；或者在壁上貼兩條與室一樣高、 寬的濾紙條，一端浸進展開劑中，密封室頂?shù)纳w。 ② 展開劑一般為兩種以上互溶的有機溶劑，并且臨用時新配為宜。 ③ 薄層板點樣后，應(yīng)待溶劑揮發(fā)完，再放人展開室中展開。 ④ 展開應(yīng)密閉，展距一般為8～15cm。薄層板放進展開室時，展開劑不能沒過樣點。一般情況下，展開劑浸進薄層下真?zhèn)€高度不宜超過0.5cm。 ⑤ 展開劑每次展開后，都需要更換，不能重復(fù)使用。 ⑥ 展開后的薄層板用適當?shù)姆椒?，使溶劑揮發(fā)，然后進行檢視。 ⑦ Rf值一般控制在0.3～0.8，當Rf值很大或很小時，應(yīng)適當改變活動相的比例。 ⑷ 斑點的檢出 展開后的薄層板經(jīng)過干燥后，常用紫外光燈照射或用顯色劑顯色檢出斑點。對于無色組分，在用顯色劑時，顯色劑噴灑要均勻，量要適度。紫外光燈的功率越大，暗室越暗，檢出效果就越好。 展開分離后，化合物在薄層板上的位置用比移值(Rf值)來表示?；衔锇唿c中心至原點的間隔與溶劑前沿至原點的間隔的比值就是該化合物的Rf值。
