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閱讀：112發(fā)布時(shí)間：2025-12-27
內(nèi)容大綱
什么是微生物檢測(cè)?
飲用與包裝水的水質(zhì)規(guī)范
常見(jiàn)水中微生物檢測(cè)方法
水中微生物檢測(cè)流程
挑選微生物檢測(cè)設(shè)備的兩大重點(diǎn)
因此微生物的檢測(cè)可確認(rèn)樣品中特定微生物的存在狀況與數(shù)量，或可監(jiān)測(cè)環(huán)境及產(chǎn)品是否受到污染及受污染的程度，是制藥、食品、飲料、化妝品等行業(yè)中重要的質(zhì)量管控項(xiàng)目 (quality control)，以確保最終產(chǎn)品的安全。
水是自然界重要的生物資源之一，生物皆賴以為生，而致病性微生物的接觸、攝入是其主要風(fēng)險(xiǎn)之一。為維護(hù)生態(tài)環(huán)境及保障用水的安全，微生物含量的監(jiān)測(cè)，是評(píng)估衛(wèi)生、質(zhì)量的常用指標(biāo)。
我國(guó)對(duì)于微生物的規(guī)范，除了河川、湖泊、海域等環(huán)境的地面水體外，也訂定飲用水、包裝及盛裝飲用水等相關(guān)規(guī)范。
依我國(guó)行政院環(huán)保署及衛(wèi)生福利部公告水質(zhì)微生物標(biāo)準(zhǔn)整理如下。其中針對(duì)市售包裝/盛裝飲用水，除了在水源、水質(zhì)須符合飲用水水源及水質(zhì)相關(guān)規(guī)范外，水體經(jīng)處理后也應(yīng)符合我國(guó)衛(wèi)生福利部公告之食品中微生物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。
常見(jiàn)的水質(zhì)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)
1、生活飲用水參考標(biāo)準(zhǔn)：
GB 5749-2006 生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
GBT 5750.1-2006 生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 總則
GBT 5750.2-2006 生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 水樣的采集和保存
GBT 5750.3-2006 生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 水質(zhì)分析質(zhì)量控制
GB/T 5750.4-2006 生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 感官性狀和物理指標(biāo)
GB/T 5750.5-2006 生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 無(wú)機(jī)非金屬指標(biāo)
GB/T 5750.6-2006 生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 金屬指標(biāo)
GB/T 5750.7-2006 生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 有機(jī)物綜合指標(biāo)
2、工業(yè)鍋爐用水標(biāo)準(zhǔn)：
GB/T 6904－2008 工業(yè)循環(huán)冷卻水及鍋爐用水中pH的測(cè)定
GB/T 6911－2007 工業(yè)循環(huán)冷卻水和鍋爐用水中硫酸鹽的測(cè)定
GB/T 12152－2007 鍋爐用水和冷卻水中油含量的測(cè)定
GB/T 13689－2007 工業(yè)循環(huán)冷卻水和鍋爐用水中銅的測(cè)定
GB/T 12149－2007 工業(yè)循環(huán)冷卻水和鍋爐用水中硅的測(cè)定
GB/T 14424－2008 工業(yè)循環(huán)冷卻水中余氯的測(cè)定
GB/T 15456－2008 工業(yè)循環(huán)冷卻水中化學(xué)需氧量(COD)的測(cè)定 法
GB/T 15453－2008 工業(yè)循環(huán)冷卻水和鍋爐用水中氯離子的測(cè)定
3、工業(yè)廢水相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)：
GB3544-2008造紙工業(yè)水污染物排放標(biāo)準(zhǔn)
GB4914-2008海洋石油開(kāi)發(fā)工業(yè)含油污水排放標(biāo)準(zhǔn)
GB4287-92紡織染整工業(yè)水污染物排放標(biāo)準(zhǔn)
GB13457-92肉類(lèi)加工工業(yè)水污染物排放標(biāo)準(zhǔn)
GB13458-2001合成氨工業(yè)水污染物排放標(biāo)準(zhǔn)
GB13456-92鋼鐵工業(yè)水污染物排放標(biāo)準(zhǔn)
GB 20425-2006皂素工業(yè)水污染物排放標(biāo)準(zhǔn)
GB 20426-2006煤炭工業(yè)污染物排放標(biāo)準(zhǔn)
水中微生物的檢測(cè)有多種方法，常見(jiàn)的有多管發(fā)酵法 (multiple-tube fermentation method or MPN method)、涂抺法 (spread plate method)、混合稀釋法 (pour plate method) 及濾膜法 (membrane filter method)。
濾膜法是一種廣為使用的分離技術(shù)，已于1961年被美國(guó) (U.S. EPA) 采用。與其它方法相比，濾膜法的優(yōu)勢(shì)包含：前置準(zhǔn)備工作少、樣品具高度代表性、可降低偽陽(yáng)(陰)性機(jī)率、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確等，是水質(zhì)、液態(tài)樣品中微生物的主要分離技術(shù)。
濾膜法 前置作業(yè) 制備 agar plate 培養(yǎng)時(shí)程 24 ± 2 小時(shí) 耗材 濾膜、培養(yǎng)皿 樣品處理量 大 適用熱敏感物質(zhì) 是 適用樣品狀態(tài) 低濁度之一般水樣 準(zhǔn)確度 高 結(jié)果判定 直接觀察計(jì)數(shù)菌落 (colony) 數(shù)量 菌株分離 是 其它 ?濾膜可直接轉(zhuǎn)移至不同培養(yǎng)基進(jìn)行試驗(yàn) ?可有效移除水樣中抗菌化學(xué)物質(zhì)
濾膜法是將液態(tài)檢體經(jīng)一定孔徑的濾膜過(guò)濾后，將大于其孔徑的微生物滯留于濾膜上，于適當(dāng)培養(yǎng)基及環(huán)境下進(jìn)行微生物培養(yǎng)，最后透過(guò)觀察、計(jì)數(shù)得到樣品中微生物的數(shù)量。
微生物檢測(cè)流程以「飲用水中大腸桿菌群檢測(cè)方法－濾膜法 (NIEA E230.55B)」 為例：
· 實(shí)驗(yàn)應(yīng)全程于無(wú)菌操作臺(tái)中進(jìn)行。
· 前置作業(yè)：將過(guò)濾裝置(filtration apparatus)中的不銹鋼濾杯(funnel)及浸泡過(guò) 95 % 酒精的鑷子以 電子點(diǎn)火式本生燈進(jìn)行火焰滅菌，冷卻至室溫備用。
洛科電子點(diǎn)火式本生燈均通過(guò)歐盟CE安全認(rèn)證，快速點(diǎn)火，焰力穩(wěn)定，溫度可達(dá) 1300℃
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檢測(cè)步驟：
1. 將無(wú)菌濾膜 (sterile membrane filter) 放置于濾杯基座上，加入少量無(wú)菌稀釋液，以測(cè)定過(guò)濾裝置是否裝置妥當(dāng)。
2. 檢測(cè)或稀釋前，劇烈搖晃 25 次以上，以充分混合樣品。
3. 加入 100 mL 水樣以真空幫浦 (vacuum pump) 過(guò)濾，再以 20 mL 以上之無(wú)菌稀釋液沖洗濾杯。
4. 移開(kāi)濾杯，取出過(guò)濾后之濾膜放置于含有培養(yǎng)基之培養(yǎng)皿上。濾膜應(yīng)與培養(yǎng)基貼合，避免產(chǎn)生氣泡。
5. 將培養(yǎng)基倒置于培養(yǎng)箱 (incubator) 內(nèi)，以 35 ± 1 oC 培養(yǎng) 24 ±2 小時(shí)。 培養(yǎng)后，取出培養(yǎng)基，以 Galaxy 330 菌落計(jì)數(shù)器 (colony counter) 計(jì)數(shù)并記錄培養(yǎng)皿中金屬光澤菌落數(shù)。若菌落太多造成計(jì)困難時(shí)，則以「菌落太多無(wú)法計(jì)數(shù)」(Too numerous to count; C) 表示。
6. 結(jié)果處理：以公式計(jì)算大腸桿菌群密度，單位為 CFU/100 mL (Colony forming units/100 mL)。
水中微生物檢測(cè)是將水樣過(guò)濾后，再將濾膜放置培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，觀察微生物生長(zhǎng)的情形。檢測(cè)過(guò)程中常有多重復(fù)樣品需求，且常需倒除大量廢液。在采購(gòu)相關(guān)設(shè)備時(shí)，可考慮以下兩大重點(diǎn)：
1) 選擇可以快速滅菌的設(shè)備
實(shí)驗(yàn)設(shè)備常以高壓滅菌釜 (autoclave) 進(jìn)行滅菌，動(dòng)輒需花費(fèi)數(shù)小時(shí)。為了加速實(shí)驗(yàn)流程，除了可以準(zhǔn)備多組設(shè)備方便交替使用以外，也可考慮使用能夠快速滅菌的材質(zhì)，例如以不銹鋼制成的設(shè)備，可以直接以火焰滅菌，只需數(shù)秒時(shí)間加熱并冷卻后，就能立即檢測(cè)樣品。不僅大幅縮短樣品處理時(shí)間，也讓流程更順暢。
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2) 方便排除廢液。
微生物檢測(cè)所過(guò)濾的水樣，不需特殊處理即可直接倒除，然而，如果過(guò)濾的水樣還要用廢液瓶搜集后再倒掉，等于多花一次功夫。
如果選用具有直接排水設(shè)計(jì)的設(shè)備，就可以將過(guò)濾后的廢水直接引導(dǎo)至水槽，省去倒除廢液的步驟、節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
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