乳酸含含量lactic acid，LA試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)，咨詢！

乳酸含含量lactic acid，LA試劑盒說(shuō)明書(shū)
(??光光度法50T/24S)
測(cè)定意義
乳酸是生物體代謝過(guò)程中重要的中間產(chǎn)物，與糖代謝??脂類代謝??蛋白質(zhì)代謝及??胞內(nèi)能??
代謝密??相關(guān)，乳酸含??是評(píng)估糖元代謝的和有氧代謝的重要指標(biāo)??
測(cè)定原理
乳酸在乳酸脫氫酶的作用??生成丙酮酸，同時(shí)使NAD+還原生成NADH 和H+，H+傳遞給PMS
生成的PMSH2 還原INT 生成紅色物質(zhì)，在530nm 處有特征吸收峰??
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平??研缽??離心機(jī)??可見(jiàn)??光光度????1 mL 玻璃比色皿??恒溫水浴鍋??
試劑組成和配制
提取液??液體55mL×1 瓶，4℃保存??
試劑一??液體8mL×1 瓶，4℃保存??
試劑????液體12mL×1 瓶，4℃保存??
試劑????粉劑×1 支，-20℃避光保存??臨用前??入1.2mL 蒸餾水充??溶解??
試劑四??粉劑×1 瓶，4℃避光保存??臨用前?? 12mL 蒸餾水充??溶解??
試劑五??粉劑×1 支，4℃避光保存??
標(biāo)準(zhǔn)品??液體1mL×1 支，4℃保存??
顯色液??臨用前根據(jù)用??按照提取液??V????試劑????V????試劑四??V????試劑五??m??=1??
0.3??3??15??mg??的比例充??混勻??
樣本處理
1. 組????按照質(zhì)????g????提取液體??(mL)為1??5~10 的比例??建議??取約0.1g，??入1mL
提取液????入提取液，冰浴勻漿后于4℃，12000g 離心10min，取??清測(cè)定??
2. ??胞??按照??胞數(shù)????104 個(gè)????提取液體????mL??為500~1000??1 的比例??建議500
萬(wàn)??胞??入1mL 提取液??，冰浴超聲波破碎??胞????率300w，超聲3 ??，間隔7 ??，
總時(shí)間3min????于4℃，12000g 離心10min，取??清測(cè)定??
3. 血清??直接測(cè)定??
測(cè)定操作
空白管 樣品對(duì)照管 樣品測(cè)定管 標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照管 標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定管
樣品??mL?? 0.05 0.05
標(biāo)準(zhǔn)品??mL?? 0.05 0.05
H2O??mL?? 0.5 0.3 0.45 0.3 0.45
試劑一??mL?? 0.15 0.15
試劑????mL?? 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
顯色液??mL?? 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3
充??混勻，于37℃反應(yīng)30min，于1mL 玻璃比色皿，空白管調(diào)零，測(cè)定530nm 處吸光值，
??別記為A1，A2，A3，A4，△A 樣=A2-A1??△A 標(biāo)= A4-A3
??算公式
1. 按照蛋白含????算
LA 含????μmol/mg prot??=△A 樣÷△A 標(biāo)×C 標(biāo)÷ Cpr
=2×△A 樣÷△A 標(biāo)÷ Cpr
2. 按照樣本質(zhì)????算
LA 含????μmol/g??=△A 樣÷△A 標(biāo)×C 標(biāo)÷ W
=2×△A 樣÷△A 標(biāo)÷ W
3. 按照??胞數(shù)????算
LA 含????μmol/104 cell??=△A 樣÷△A 標(biāo)×C 標(biāo)÷ ??胞數(shù)??
=2×△A 樣÷△A 標(biāo)÷ ??胞數(shù)??
4. 按照液體體????算
LA 含????μmol/mL??=△A 樣÷△A 標(biāo)×C 標(biāo)
=2×△A 樣÷△A 標(biāo)
C 標(biāo)??標(biāo)準(zhǔn)品濃度，2mmol/L ??W??樣本質(zhì)??，g/mL??Cpr??樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL
注意??項(xiàng)
1. 空白管??標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照管??標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定管只需做一次??
2. 若吸光值超過(guò)1.2，請(qǐng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂尯笤龠M(jìn)行測(cè)定，并在??算公式中乘以稀釋倍數(shù)??